[发明专利]用于产生巨核细胞的组合物和方法在审
| 申请号： | 201980017430.5 | 申请日： | 2019-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN111836886A | 公开（公告）日： | 2020-10-27 |
| 发明（设计）人： | J·索恩;B·戴克斯特拉 | 申请（专利权）人： | 血小板生源说股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078;C12N5/0786;C12N5/00 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 李政璋;陈扬扬 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 产生 巨核细胞 组合 方法 | ||
1.一种用于产生巨核细胞的方法，其包括：
在低粘附或非粘附条件下并在搅拌下扩增多能干细胞，其中扩增的多能干细胞形成自聚集球状体；
在第一培养基中将多能细胞分化成造血内皮细胞；
在第二培养基中将所述造血内皮细胞分化成巨核细胞祖细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其中，将所述多能细胞分化成造血内皮细胞是在粘附条件下于基质上进行的。
3.如权利要求2所述的方法，其中，所述基质包括层粘连蛋白。
4.如权利要求2所述的方法，其中，所述基质与二维表面附连。
5.如权利要求2所述的方法，其中，所述基质与三维结构附连。
6.如权利要求1所述的方法，其中，将所述多能细胞分化成造血内皮细胞是在低粘附或非粘附条件下进行的，以使得所述造血内皮细胞能够自聚集。
7.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一培养基包含骨形态发生蛋白4(BMP4)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)中的一种或多种。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述第一培养基还包含WNT调节剂。
9.如权利要求1所述的方法，其中，所述第二培养基包含干细胞因子(SCF)、促血小板生成素(TPO)、Fms相关酪氨酸激酶3配体(Flt3-L)、白介素-3(IL-3)、白介素-6(IL-6)和肝素中的一种或多种。
10.如权利要求1所述的方法，其中，所述多能干细胞是人诱导型多能干细胞。
11.如权利要求1所述的方法，还包括收获和解离扩增的多能干细胞的步骤。
12.如权利要求1所述的方法，还包括在将所述巨核细胞祖细胞分化成巨核细胞之前将所述巨核细胞祖细胞接种到培养基中的非粘附表面上的步骤。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，还包括在第三培养基中将所述巨核细胞祖细胞分化成巨核细胞的步骤。
14.如权利要求13所述的方法，其中，所述第三培养基包含干细胞因子(SCF)、促血小板生成素(TPO)、白介素-6(IL-6)、白介素9(IL-9)和肝素中的一种或多种。
15.一种用于产生巨核细胞的方法，其包括：
在第一培养基中将多能细胞分化成造血内皮细胞；和
在第二培养基中将所述造血内皮细胞分化成巨核细胞祖细胞，
其中所述分化多能细胞和所述分化造血内皮细胞中的至少一项是在基质包被的三维结构上进行的。
16.如权利要求15所述的方法，其中，所述三维结构是微运载体。
17.如权利要求15所述的方法，其中，所述三维结构是微运载体。
18.如权利要求15所述的方法，其中，所述基质包括层粘连蛋白。
19.如权利要求15所述的方法，其中，所述第一培养基包含骨形态发生蛋白4(BMP4)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)中的一种或多种。
20.如权利要求15所述的方法，其中，所述第一培养基还包含WNT调节剂。
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