[发明专利]用于产生巨核细胞的组合物和方法在审
申请号: | 201980017430.5 | 申请日: | 2019-01-05 |
公开(公告)号: | CN111836886A | 公开(公告)日: | 2020-10-27 |
发明(设计)人: | J·索恩;B·戴克斯特拉 | 申请(专利权)人: | 血小板生源说股份有限公司 |
主分类号: | C12N5/078 | 分类号: | C12N5/078;C12N5/0786;C12N5/00 |
代理公司: | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人: | 李政璋;陈扬扬 |
地址: | 美国马*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 产生 巨核细胞 组合 方法 | ||
提供了由干细胞产生巨核细胞祖细胞(前MK)和巨核细胞(MK)的方法。本公开进一步提供了包含前MK和MK及其裂解物的组合物,以及使用前MK、MK、其裂解物及其组合物的方法。
政府支持声明
本工作得到了美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)下述资助号的资助:1R44HL131050-01、1R43AI125134-01A1和1SB1HL137591-01。政府对本发明享有某些权利。
相关申请
本申请要求2018年1月5日提交的美国临时申请序列号62/614,117的权益和优先权,通过引用其全部内容纳入本文。
技术领域
本公开涉及产生巨核细胞祖细胞和巨核细胞的方法,具有巨核细胞祖细胞和巨核细胞的组合物及其用途。
背景
血小板是负责活动性出血部位血块形成和血管修复的血液细胞。生理学角度而言,血小板由称之为巨核细胞(MK)的亲本细胞在骨髓中产生,所述MK 占骨髓中细胞的0.1%。成熟的MK位于骨髓中的窦状血管(sinusoidal blood vessel)外,并将称为前血小板(proplatelet)的长结构扩展到循环系统中。前血小板作为血小板产生的组装线,并从其末端依次释放血小板。
MK是由造血干细胞通过多步骤分化过程在骨髓中产生的。暴露于各种细胞因子、趋化因子和生长因子(包括促血小板生成素)导致造血干细胞分化成多能祖细胞,然后分化成定型的巨核细胞祖细胞,也称之为前MK。经过进一步分化,包括细胞扩大、DNA含量增加、核内有丝分裂和颗粒形成,产生了成熟MK。MK将其细胞团转化成前血小板伸展(extension)以产生/释放无核血小板。
血小板计数低是多种疾病和疗法(包括癌症治疗、移植和手术)的显著后果,对于这些疾病和疗法,血小板是防止由于失控出血而导致的死亡的关键一线疗法。血小板单位(3x10^11血小板/200-400mL)完全来自人志愿者供体并且必须保存在室温下以避免不可逆的活化。然而,在该温度下,存在细菌生长的风险,这将血小板单位的保存期限限制为5天,其中2天被病原体筛选消耗并且1天被运输消耗。因此,血液中心通常没有超过1.5天的血小板库存可用于输血,这在紧急情况下会迅速耗尽。可能会出现血小板供体短缺,尤其是在关键时刻。仅民用需求的不断增加就超过供应量约20%,并且在紧急情况下库存将迅速耗尽。此外,单位和供体之间广泛的功能差异导致过度输血以确保有效的出血控制。因此,迫切需要提供血小板来源的巨核细胞,以及产生巨核细胞的新型、改进方法。
发明内容
本公开提供了由干细胞产生巨核细胞祖细胞(前MK)和巨核细胞(MK) 的方法。本公开进一步提供了包含前MK和MK及其裂解物的组合物,以及使用前MK、MK、其裂解物及其组合物的方法。
在一些实施方式中,本公开提供了用于产生巨核细胞的方法,其包括:在低粘附或非粘附条件下并在搅拌下扩增多能干细胞,其中扩增的多能干细胞形成自聚集球状体;在第一培养基中将多能细胞分化成造血内皮细胞;在第二培养基中将造血内皮细胞分化成巨核细胞祖细胞。将多能细胞分化成造血内皮细胞是在粘附条件下于基质上进行的。在一些实施方式中,将多能细胞分化成造血内皮细胞是在低粘附或非粘附条件下进行的,以使得造血内皮细胞能够自聚集。
在一些实施方式中,本公开提供了用于产生巨核细胞的方法,其包括:在第一培养基中将多能细胞分化成造血内皮细胞;和在第二培养基中将造血内皮细胞分化成巨核细胞祖细胞,其中分化多能细胞和分化造血内皮细胞中的至少一项是在基质涂覆的三维结构上进行的。三维结构可以是微运载体或微运载体。
在一些实施方式中,本公开提供了用于产生巨核细胞的方法,其包括:在第一培养基中将多能细胞分化成造血内皮细胞;和在第二培养基中将造血内皮细胞分化成巨核细胞祖细胞,其中分化多能细胞和分化造血内皮细胞中的至少一项是在低粘附或非粘附条件下进行的,以使得造血内皮细胞能够自聚集。
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