[发明专利]用于分析包含生物细胞的生物样本的方法以及用于实施该分析方法的分析设备

说明书

本发明涉及用于分析包含生物细胞的生物样本的方法以及用于实施该分析方法的分析设备。所述分析方法包括为生物样本中包含的每个生物细胞测量流式细胞术参数的步骤；为生物样本中的每个生物细胞在N维空间中确定一个点的步骤，所述点的坐标是根据为相应生物细胞测量的流式细胞术参数而定义的，其中N是大于或等于3的整数；根据所测量的流式细胞术参数将所述点自动分组成不同的细胞簇，从而定义样本簇文件的步骤；以及将样本簇文件与参考簇文件进行比较的步骤，每个参考簇文件由相应病理或异常生物样本的流式细胞术参数定义。

技术领域

本发明涉及一种用于分析包含生物细胞尤其是血细胞的生物样本的方法，以及一种适于实施这种分析方法的分析设备。

背景技术

在血液中循环的细胞包括无核细胞和有核细胞，无核细胞为血红细胞或红细胞(每mm³的正常血液约500万个)、血小板(每mm³约300,000个)，有核细胞为白细胞(每mm³约10,000个)。血液中可能含有其他有核细胞，如成红细胞(其是未成熟的血红细胞)或其他稀有细胞。各细胞类型构成了所谓的群体。

其他生物液体如脑脊液或尿液包含血细胞。随后，它涉及生物样本，但不限于血液样本，而是包含血细胞的所有生物液体。

无论是否使用流式细胞仪，常规血液分析仪都旨在进行全血细胞计数，并在通过细胞类型检测到定量异常时提供定性信息。

由于更复杂的技术和特定试剂的应用，免疫血液学专业的流式细胞术设备可以针对影响所有细胞类型的血液病理学。

需要指出的是，流式细胞术包括进行至少一次流体动力聚焦，以及使血细胞一个接一个地通过测量装置，根据所实施的，该测量装置为每个细胞产生一定数量的物理测量值。为了清楚地进行测量，细胞应该分开，并以允许测量和采集的速度滚动。此外，必须有足够的计数，以便对每个群体进行适当的统计评估。为此，血液样本的分析不是使用纯血液而是使用稀释的血液。此外，考虑到红细胞的数量是白细胞的数千倍，为了进行统计上代表白细胞群体的分析，样本必须在血细胞计数器中经过几分钟的时间。为了将样本在血细胞计数器中的通过时间减少10倍，另一种解决方案在于，除了稀释样本之外，还进行裂解，该裂解选择性地破坏红细胞，以获得白细胞充分浓缩的样本，从而对这些群体进行统计上正确的计数。

产生的流式细胞术参数有两种类型：

-一种是物理或形态学性质：通过阻抗(Coulter效应)测量细胞体积，测量由每个细胞在激光束中通过而产生的不同角度的光吸收和衍射，以及测量核酸的荧光，这些核酸通过预先进入细胞中存在的一种或多种荧光染料发出荧光。这些数据使得能够通过每个细胞的体积、通过其光吸收(取决于其表面和内容物)、通过其内部复杂性、通过其表面、其组成的性质和通过其对有核细胞的核酸活性来表征每个细胞；

-一种是免疫学性质(免疫血液学)：将样本置于含有抗体的试剂中，该抗体与荧光染料结合并且对某些细胞表面表达的受体具有特异性。细胞在一束或几束激光束中的通过会产生与细胞表面标记成比例的信号，从而允许表征细胞。

一种用于分析包含生物细胞的生物样本的方法，以已知的方式包括以下步骤：

-使待分析的生物样本的生物细胞通过流式细胞仪的测量单元，

-为待分析的生物样本中所包含的每个生物细胞测量N个流式细胞术参数，例如形态学或免疫学流式细胞术，

-为待分析的生物样本的每个生物细胞确定N维空间中的一个点，该点的坐标是根据为相应生物细胞测量的流式细胞术参数而定义的，其中N是大于或等于2的整数，

-对于其功能限于全血细胞计数的设备，根据所测量的流式细胞术参数将点聚类成不同的细胞簇，从而定义样本簇文件，然后使用自动分区方法、统计学方法或其它点密度方法来执行聚类步骤，

-对于执行血液免疫测量的更复杂的设备，