[发明专利]用于基因疗法的修饰的rAAV衣壳蛋白

说明书

本发明涉及用于基因疗法的重组的腺相关病毒(rAAV)病毒体，其中所述rAAV病毒体包含新型衣壳蛋白。具体地，本发明涉及此类病毒体在基因疗法中用于治疗关节炎疾病诸如类风湿性关节炎或其症状的用途，优选地通过关节内施用。

技术领域

本发明涉及基于重组的腺相关病毒(rAAV)的基因疗法的领域，具体地涉及突变衣壳rAAV在治疗或预防关节炎疾病中的用途。

背景技术

重组的腺相关病毒(rAAV)载体已经展示出在人体内递送基因的优异的安全性和功效特征。因此，rAAV载体广泛用于体内基因疗法并显示对临床前模型以及临床试验安全有效。rAAV载体已在一系列疾病的多种基因疗法临床试验中取得成功，所述疾病包括血友病B、血友病A、囊肿性纤维化、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、脊髓性肌萎缩(SMA)、帕金森病、杜兴氏肌肉营养不良症和莱伯氏先天性黑蒙症(Selot等人,Current PharmaceuticalBiotechnology,2013,14,1072-1082)。阿利泼金(Alipogene tiparvovec)(uniQure)作为治疗脂蛋白脂肪酶缺乏症(LPLD)的基因疗法已在欧洲获得销售许可。随后，对治疗皮肤癌的基于疱疹病毒的Talimogene laherparepvec(T-Vec，Amgen)和治疗ADA-SCID(GSK)的基于离体干细胞逆转录病毒的基因疗法Strimvelis授予了基因疗法药物许可。

基于rAAV载体的基因疗法也应用于类风湿性关节炎(RA)中，这是影响～1％人群的慢性炎性疾病。RA病理遍布滑膜关节。关节的局部性质使得体内基因疗法非常有吸引力。已应用了提供抗炎蛋白的疗法，旨在使RA平衡向抗炎状态偏移。

许多工作把重点放在了开发具有期望特性的AAV衣壳蛋白上。此类特性可以包括更高的转导效率、组织/器官趋性、非期望组织/器官的脱靶，或预先存在的中和抗体的避免。

然而，在本领域中仍然需要进一步改善rAAV基因疗法载体。具体地，需要改善rAAV基因疗法载体在关节炎疾病中的使用，并且更精确地，需要改善向靶向组织，诸如滑膜关节或滑膜关节内的特定细胞类型，优选地成纤维样滑膜细胞(FLS)递送遗传物质的效率。

发明内容

在第一方面，本发明涉及一种用于治疗或预防关节炎疾病或用于治疗或预防与关节炎疾病相关的症状的包含修饰的衣壳蛋白的重组的腺相关病毒(rAAV)病毒体，其中修饰的衣壳蛋白在所述蛋白质的C末端部分中包含氨基酸序列Z，所述氨基酸序列Z的残基暴露在衣壳蛋白的表面上。优选地，氨基酸序列Z：

包含下式I的氨基酸残基的序列或由其组成：

y–G–Q–x–G–(x)₃–R–(x)₃–y–A–Q–A–A

其中x表示单个氨基酸残基或其中y表示0、1或2个氨基酸残基，并且

存在于与野生型AAV衣壳蛋白的从C末端起第100–200位，优选地第120–180位，更优选地第130–170位，更优选地第140–160位氨基酸残基相对应的位置处。

优选地，式I的氨基酸残基暴露在衣壳蛋白的表面上。在一个优选实施方案中，序列Z在修饰的衣壳蛋白中被包含在由下式II表示的位置处：

EEEIxxxxPVATExxGxxxxNxQy–Z–(x)_nLPGMVWQxRDVYLQGPIWAKIPHTDG

其中Z、x和y如上文所定义；并且其中n为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15。