[发明专利]浮力激活细胞分选(BACS)兼容的激活/转导系统和方法

权利要求书

1.一种方法，包括在密闭容器中使包含靶细胞与包含脂质壳气核微泡的微泡试剂的宿主液体，以及一种或多种结合到靶细胞上的细胞表面分子的抗体或其他配体进行接触，其中所述一种或多种抗体或其他配体结合到靶细胞或微泡上，其中所述接触发生的时间和条件足以使靶细胞通过所述一种或多种抗体或其他配体与微泡连接；和

激活靶细胞以生成活化的靶细胞。

2.如权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括在密闭容器中浓缩与微泡相连的靶细胞。

3.如权利要求1或2所述的方法，所述方法进一步包括在产生与微泡相连的靶细胞后，使微泡塌陷和/或破裂。

4.如权利要求3所述的方法，在密闭容器中浓缩与微泡相连的靶细胞后，发生微泡的塌陷和/或破裂。

5.如权利要求3-4中任一项所述的方法，其中所述微泡的塌陷和/或破裂发生在开始接触后约180min内。

6.如权利要求3-4中任一项所述的方法，其中所述微泡的塌陷和/或破裂发生在开始接触后约1min-约180min内。

7.如权利要求3-4中任一项所述的方法，其中所述微泡的塌陷和/或破裂发生在开始接触后约2min-约60min内。

8.如权利要求3-4中任一项所述的方法，其中所述微泡的塌陷和/或破裂发生在开始接触后约5min-约30min内。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述活化无需将靶细胞从微泡或微泡残余物中分离出来即可实现。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述接触包括在密闭容器中接触宿主液体，所述宿主液体包括(i)与一种或多种抗体或其他配体结合的靶细胞，和(ii)能够通过接头直接或间接与一种或多种抗体或其他配体结合的微泡。

11.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述接触包括在密闭容器中接触宿主液体，所述宿主液体包括(i)靶细胞，和(ii)显示一种或多种抗体或其他配体的微泡试剂，所述抗体或其他配体与靶细胞上的细胞表面分子结合。

12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述一种或多种抗体或其他配体包括一种或多种抗体。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括用包括转基因的载体如病毒载体转导活化的靶细胞，以生成转导的靶细胞，其中所述转导包括在适于转导活化的靶细胞的条件下，将活化的靶细胞与包括转基因载体的基因转导试剂接触。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述转导在密闭容器中进行。

15.如权利要求13或14所述的方法，其中所述转导包括将活化的CD3⁺靶细胞与基因工程病毒载体接触，所述载体包括编码嵌合(两部分)跨膜融合蛋白的人工基因构建体，所述融合蛋白包括细胞外抗CD19单链抗体片段和细胞内T细胞信号传导蛋白(CD3-ζ)和共刺激(4-1BB)结构域(所谓的嵌合抗原受体，或CAR)，并且其中所得的转导靶细胞是CAR-T细胞。

16.如权利要求13-15中任一项所述的方法，其中所述开始接触的时间点和通过将活化的CD3⁺靶细胞与基因工程病毒载体接触而开始转导的时间点之间的时间间隔为约12h-约36h。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括扩增活化的靶细胞或转导的靶细胞，其中扩增包括在适于促进活化的靶细胞或转导的靶细胞增殖的条件下培养活化的靶细胞或转导的靶细胞。