[发明专利]分离方法

权利要求书

1.一种分离免疫球蛋白变体的方法，其包括以下步骤：

a)提供填充有Fc结合亲和色谱树脂的柱；

b)将包含至少两种含Fc的免疫球蛋白变体的样品加载到所述柱上；

c)任选地用洗涤液洗涤所述柱；和

d)输送洗脱剂通过所述柱，以从所述柱中至少洗脱目标免疫球蛋白变体，并且回收包含富集形式的所述目标免疫球蛋白变体的一个或多个洗出液级分。

2.权利要求1的方法，其中在步骤d)中，所述一个或多个洗出液级分包含富集形式的所述目标免疫球蛋白变体。

3.权利要求1或2的方法，其中在步骤d)中，目标含Fc的免疫球蛋白变体浓度与全部含Fc的免疫球蛋白变体浓度的比率比所述样品中高至少50%。

4.任何前述权利要求的方法，其中所述含Fc的免疫球蛋白变体之一是完整免疫球蛋白，而所述含Fc的免疫球蛋白变体中的另一种是免疫球蛋白的含Fc片段。

5.任何前述权利要求的方法，其中所述含Fc的免疫球蛋白变体之一是具有Fc区和两个Fab区的完整免疫球蛋白，而所述含Fc的免疫球蛋白变体中的另一种是具有Fc区和仅一个Fab区的半抗体。

6.任何前述权利要求的方法，其中所述Fc结合亲和色谱树脂是蛋白A树脂，例如碱稳定的蛋白A树脂。

7.任何前述权利要求的方法，其中所述Fc结合亲和色谱树脂具有小于70微米的体积加权中值粒径。

8.任何前述权利要求的方法，其中所述Fc结合亲和色谱树脂具有40 - 65微米的体积加权中值粒径。

9.任何前述权利要求的方法，其中在步骤c)中，具有递减pH梯度的洗脱剂被输送通过所述柱。

10.权利要求9的方法，其中所述梯度的起始pH为至少pH 4.5，并且所述pH梯度的终止pH为pH 3.5或更低。

11.任何前述权利要求的方法，其中在步骤b)中，加载到所述柱上的含Fc的免疫球蛋白变体的总量超过所述柱的动态免疫球蛋白结合容量。

12.任何前述权利要求的方法，其中在步骤b)中，加载到所述柱上的含Fc的免疫球蛋白变体的总量为至少80 mg/ml柱床体积。

13.权利要求11或12的方法，其中所述目标含Fc的免疫球蛋白变体是具有Fc区和两个Fab区的完整免疫球蛋白，并且与所述样品中存在的含Fc的免疫球蛋白片段，例如具有Fc区和单个Fab区的半抗体相比，与柱更强地结合。

14.任何前述权利要求的方法，其中在步骤d)期间，回收包含目标含Fc的免疫球蛋白变体的洗脱级分，其中目标含Fc的免疫球蛋白变体浓度与全部含Fc的免疫球蛋白变体浓度的比率比所述加载样品中高至少50%。

15.权利要求14的方法，其进一步包括在步骤d)之后，在后续色谱步骤中纯化所述目标含Fc的免疫球蛋白变体的步骤e)。

16.权利要求15的方法，其中所述后续色谱步骤是阳离子交换或多模式阳离子交换步骤。

17.权利要求16的方法，其中所述阳离子交换或多模式阳离子交换步骤以结合-洗脱模式执行。

18.权利要求17的方法，其中步骤e)中的洗脱用pH梯度，例如连续梯度或阶梯梯度执行。

19.权利要求17的方法，其中所述后续色谱步骤是阳离子交换步骤，并且步骤e)中的洗脱用电导率梯度，例如连续梯度或阶梯梯度执行。