[发明专利]新型抗胸苷激酶抗体

说明书

本发明涉及特异性结合人胸苷激酶1(hTK‑1;SEQ ID NO:1)上的构象依赖性表位的新型单克隆抗体，用于采用所述抗体定量hTK‑1的方法及抗hTK‑1抗体在定量hTK‑1中的用途。

本发明涉及特异性结合人胸苷激酶1 (hTK-1; SEQ ID NO:1)的新型单克隆抗体，用于采用所述抗体定量hTK-1的方法及抗hTK-1抗体在定量hTK-1中的用途。

尽管在近几十年中取得所有进展，但癌症仍是第二大死亡原因(Siegel等人，2013)。为了更好地理解癌症生物学和更好地评价重要的临床相关问题(诸如恶性肿瘤的诊断或复发的检测)(仅提及两个关键主题)，生物标志物是至关重要的。

一类在肿瘤学领域中特别感兴趣的生物标志物是一类增殖生物标志物，包括Ki-67，增殖细胞核抗原(PCNA)和胸苷激酶(TK-1)。任何肿瘤都包含相对较高分数的增殖细胞，并且增殖的标志物应该能够鉴定那些增殖的恶性细胞。现有文献表明胸苷激酶是在组织水平上，即如果通过免疫组织化学测量，相当有用的标志物。

血清TK1活性测量已用于几种不同的恶性疾病的监测和预后目的，但主要是在白血病和淋巴瘤的情况下。然而，用于测量来自体液(如血清)的循环胸苷激酶的免疫测定是惊人的，并且血清TK-1蛋白的免疫测定尚未广泛用于常规临床诊断中。

胸苷激酶1(缩写：TK1或TK-1)(ATP：胸苷5'-磷酸转移酶，EC 2.7.1.21)是一种参与DNA前体合成的酶。人胸苷激酶1(hTK-1或hTK1)的序列是已知的，并在SEQ ID NO:1中给出。

血清TK1活性可以使用放射性底物1251-dUrd (the PROLIFIGEN® TK-REA,DiaSorin Inc.)测量。近年来已经可以使用非放射定量的TK1活性测定(TK LIAISON®测定, DiaSorin Inc.)。这是灵敏且稳健的测定，并且已经在具有血液恶性病的人和狗中提供了有价值的临床信息，尤其是用于监测疗法和预测复发。

在本说明书中，引用了许多文件，包括专利申请和生产商的手册。尽管不被认为与本发明的专利性有关，但这些文件的公开内容以其整体通过引用并入本文。更具体地，所有参考文件都通过引用并入，达到如同明确地且单独地指出每篇单独文件通过引用并入相同的程度。

在过去的几十年中，已经进行许多尝试来产生针对hTK-1的有用的、灵敏和特异性的抗体。然而，迄今为止描述和可用的抗体不能满足开发用于从体液样品测量hTK-1的可靠且灵敏的免疫测定的要求。

因此，本公开的发明人的任务是开发新型的单克隆抗体，其一旦用于标准免疫测定方法中，就允许可靠检测和定量来自体液样品的hTK-1。

本发明通过提供如权利要求书中所限定的实施方案来解决该需求。

令人惊讶地，已经发现并可以显示，针对人胸苷激酶1(hTK-1；SEQ ID NO:1)的单克隆抗体解决了本发明的基本问题，所述单克隆抗体结合hTK-1的构象依赖性表位，但不结合由hTK-1的氨基酸194至225组成的多肽(SEQ ID NO:2)，并且不结合由hTK-1的15个连续氨基酸组成的任何多肽。

发明概述：

在一个实施方案中，本公开涉及特异性结合人胸苷激酶1 (hTK-1; SEQ ID NO:1)的单克隆抗体，所述抗体的特征在于其

a) 结合hTK-1的构象依赖性表位，

b) 不结合由hTK-1的氨基酸194至225组成的多肽(SEQ ID NO:2)，且

c) 不结合由hTK-1的15个连续氨基酸组成的任何多肽。

在一个实施方案中，本公开涉及用于定量hTK-1的体外方法，所述方法包括：