[发明专利]色谱柱鉴定的转变分析方法

说明书

本公开涉及一种操作色谱柱的方法。该方法涉及在包括柱填料的色谱柱的操作期间在至少一个流动相变前沿的两个或更多个间隔处收集柱出口信号和累积流量参数。基于至少一个流动相变前沿的所收集的柱出口信号和累积流量参数来确定模型γ累积分布曲线。使用模型γ累积分布曲线的参数来计算至少一个流动相变前沿的理论塔板等效高度(HETP)值，并且基于所计算的HETP值来评估色谱柱填料的质量。如果在常规柱监测期间观察到HETP的不利趋势或超过控制限度，则应评价洗脱产品质量、柱工艺性能和/或杂质去除数据以确保所识别批次的产品质量。如果产品质量或柱性能中的任一者未能满足标准设定，则应在释放以供进一步使用之前执行适当的校正动作，诸如调节、再装填或替换柱，以及鉴定。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年4月20日提交的美国临时申请62/660,340的优先权，该申请全文以引用方式并入本文。

技术领域

本发明涉及一种色谱柱鉴定的方法。

背景技术

柱色谱法是在用以制备治疗性蛋白质的纯化过程中使用的重要技术。从工作台顶部到制造厂并且贯穿整个柱寿命，随着过程扩大，必须保持柱的性能。随着柱直径、设备和缓冲剂消耗的增加以扩大过程，柱评价程序、装填床完整性的潜在变化以及物流可能会出现困难。

用于色谱柱鉴定的当前方法通过从峰最大值和与半高度处的峰的宽度的标准偏差估计平均值来计算理论塔板等效高度(HETP)，其为脉冲注射之后的色散量度。该方法的主要局限性是当峰形状偏离高斯分布时，它不提供准确的色散量度(即，HETP)。为了补偿灵敏度的不足，利用第二测量(不对称性)来评估峰偏度。该量度比较在最大峰高度的10％处的前伸峰宽度和拖尾峰宽度。该方法的局限性导致对柱性能变化的灵敏度不足，并且通常导致柱的再装填或调节，而柱性能实际上是可接受的。已经报道了用于柱鉴定的其他策略。这些策略包括使用高斯分布或非高斯分布来在过程转变中建模(参见例如Larson等人，“Use of Process Data to Assess Chromatographic Performance in Production-Scale Protein Purification Columns,”Biotechnol.Prog.19:485-492(2003)以及授予Belousov等人的美国专利9,047,438和授予Ganguly的美国专利8,410,928)。高斯方法具有与上述注射方法相同的灵敏度局限性，并且所报告的非高斯方法需要复杂的计算。

需要具有更大灵敏度和更合理限定的极限的改善的鉴定程序来监测在重复操作期间的色谱柱性能变化，并评价柱在其寿命内将执行的有效性。本发明涉及克服本领域中的这种缺陷。

发明内容

本发明的实施方案分别由本文所附的独立权利要求和从属权利要求限定，为了简洁起见，这些权利要求以引用方式并入本文。根据下面结合附图的详细描述，本发明的各个方面的其他实施方案、特征和优点是显而易见的。

在某些实施方案中，本发明提供了一种操作色谱柱的方法。该方法涉及在包括柱填料的色谱柱的第一操作期间在至少一个流动相变前沿的两个或更多个间隔处收集柱出口信号和累积流量参数。该方法还涉及使用用于上升转变前沿的式Ia或用于下降转变前沿的式Ib，基于至少一个流动相变前沿的所收集的柱出口信号和累积流量参数来确定模型γ累积分布曲线，

或者

其中C为给定V的柱出口信号，V为累积流量除以柱体积，并且k、θ和V_i为用于限定曲线的形状、缩放和偏移参数。使用式II和模型γ累积分布曲线参数k、θ和Vi来计算至少一个流动相变前沿的理论塔板等效高度(HETP)值，

其中