[发明专利]通过磁珠附着至细胞进行的基于磁性的生物淘选方法

权利要求书

1.一种筛选与抗原蛋白结合的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：

(i)制备过表达抗原蛋白的细胞，其中将生物素化的磷脂插入所述细胞的膜中并且使所述生物素化的磷脂与链霉亲和素/磁珠复合物结合；

(ii)用包括抗体或其抗原结合片段的文库处理所述细胞并使用基于磁性的系统筛选与所述抗原蛋白结合的抗体或其抗原结合片段；

(iii)使筛选的抗体或其抗原结合片段文库与不表达抗原蛋白的细胞反应，以仅选择与所述抗原蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段；以及

(iv)从所选择的抗体或其抗原结合片段分离和/或去除与除了所述抗原蛋白以外的抗原结合的抗体或其抗原结合片段。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述磷脂包括选自以下的任一种：基于PE(磷酸乙醇胺)的磷脂、基于PA(磷脂酸)的磷脂、基于PG(磷脂酰甘油)的磷脂、基于PS(磷脂酰丝氨酸)的磷脂、基于PI(磷脂酰肌醇)的磷脂、基于鞘酯的磷脂和基于甾醇的磷脂。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述磷脂包括选自以下的任一种：DHPE(1,2-双十六酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、荧光素DHPE(N-(荧光素-5-氨基硫羰基)-1-2-双十六酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、B-XDHPE(N-((6-(生物素酰基)氨基)己酰基)-1-2-双十六酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、生物素PE(1-油酰基-2-(12-生物素基(氨基十二酰基))-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、生物素PS(1-油酰基-2-(12-生物素基(氨基十二酰基))-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(铵盐))和生物素PC(1-油酰基-2-[12-生物素基(氨基十二酰基)]-sn-甘油-3-磷酸胆碱)。

4.根据权利要求1所述的方法，其中过表达抗原蛋白的所述细胞是通过如下过程来制备的，在所述细胞中生物素化的磷脂被插入所述细胞的膜中并且所述生物素化的磷脂与所述链霉亲和素/磁珠复合物结合，所述过程包括：

(a)在生物素化的磷脂的存在下培养过表达抗原蛋白的细胞，以获得其中所述生物素化的磷脂被插入所述细胞膜中的细胞；以及

(b)用链霉亲和素/磁珠复合物处理所获得细胞的所述生物素化的磷脂，以获得其中所述生物素化的磷脂被插入所述细胞膜中并且其中所述生物素化的磷脂与所述链霉亲和素/磁珠复合物结合的细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中过表达抗原蛋白的所述细胞是通过如下过程来制备的，在所述细胞中生物素化的磷脂被插入所述细胞的膜中并且所述生物素化的磷脂与所述链霉亲和素/磁珠复合物结合，所述过程包括：

(a)使生物素化的磷脂与链霉亲和素和磁珠反应，以制备磷脂/生物素/链霉亲和素/磁珠复合物；以及

(b)使所述磷脂/生物素/链霉亲和素/磁珠复合物与过表达抗原蛋白的细胞融合，以获得其中所述生物素化的磷脂被插入所述细胞膜中并且其中所述生物素化的磷脂与所述链霉亲和素/磁珠复合物结合的过表达抗原蛋白的细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，其中在含有表面活性剂的培养基中使所述细胞与所述链霉亲和素/磁珠复合物融合。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述表面活性剂包括选自以下的任一种：烷基多糖苷、鲸蜡醇、癸基葡糖苷、癸基聚葡糖苷、麦芽糖苷、NP-40、油醇、泊洛沙姆、聚山梨醇酯、山梨聚糖、Triton X-100和吐温80。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述基于磁性的系统是使用磁性分离细胞的装置。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段是内化至细胞中的抗体或其抗原结合片段。

10.根据权利要求1所述的方法，其还包括从根据所述方法选择的所述抗体或其抗原结合片段产生IgG。