[发明专利]通过磁珠附着至细胞进行的基于磁性的生物淘选方法

说明书

本发明涉及通过使用带有磁珠的细胞筛选抗体或其抗原结合片段的方法，并且更特别地涉及筛选与抗原蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段的方法，其中利用具有在其细胞膜中的生物素化的磷脂和与其表面融合的链霉亲和素‑磁珠复合物的细胞以及基于磁性的系统。

【技术领域】

本发明涉及使用附着有磁珠的细胞筛选抗体或其抗原结合片段的方法，并且更具体地涉及使用在其表面上含有磷脂/生物素/链霉亲和素/磁珠复合物并且过表达抗原蛋白的细胞用基于磁性的系统筛选与抗原蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段的方法。

【背景技术】

在1975年，用于开发单克隆抗体的技术以杂交瘤技术开始。杂交瘤技术是通过以下方式选择单克隆抗体的技术：在小鼠中诱导免疫应答，然后将B细胞与骨髓瘤细胞融合，并维持永生状态。这项技术涉及获得小鼠抗体，因此由于小鼠抗体在施加至人体时被识别为抗原从而引起免疫应答而具有副作用。这被称为“HAMA”(人抗小鼠抗体反应)(TiandraJ.J.等人,Immunol.Cell Biol.,第66卷,第367-76页,1990)。

为了克服副作用，通过应用将小鼠抗体转化为与人抗体相似的技术来开发嵌合抗体和人源化抗体。然而，仍然存在发生免疫应答和开发时间很长的问题。

在1985年开发了用于在噬菌体表面上表达蛋白质或肽的噬菌体展示技术。噬菌体展示是产生具有多种抗体片段的噬菌体文库并使用噬菌体文库进行抗体选择的方法，并且由于其选择速度快且应用相对简单而被开发者持续使用。

通过使用噬菌体文库选择、回收和扩增对所需抗原具有特异性的抗体片段的方法来选择抗体，这种方法被称为“生物淘选”。存在多种典型的淘选方法，包括使用重组蛋白淘选、细胞淘选、基于磁珠的淘选、体内淘选、和使用组织的淘选(McGuire M.J.等人,MethodMol.Biol.,第504卷,第291-321页,2009)。

使用重组蛋白淘选被普遍使用，但是不利地针对特定抗原具有抗体文库的限制，并且需要具有高纯度的纯化的抗原。使用纯化的蛋白质，难以实现蛋白质的翻译后修饰(PTM)，因此即使发现了抗体，所述抗体也可能实际上无法在体内作用。

为了克服这个问题，开发了细胞淘选，并且开发与特定膜蛋白(G蛋白偶联受体、配体门控的离子通道、受体酪氨酸激酶、和免疫球蛋白样受体)结合的抗体已经变得更容易。这种方法使用自然形式的细胞作为抗原，并且因此能够选择呈实现蛋白质的三维结构和PTM的形式的抗体。

然而，细胞淘选是劳动密集型的并且可能在实验中在使用者之间展现巨大差异。因此，存在对能够解决和克服这些问题的下一代细胞淘选的需要。

迄今为止已经通过噬菌体展示开发出多种诊断性和治疗性抗体，并且与自动化系统联合的高速大规模筛选系统方法也正在开发中，以建立快速准确的淘选方法。

因此，作为开发以高速度和高容积筛选抗体的方法的大量努力的结果，本发明人发现，可以通过使用基于磁性的系统以及含有磁珠和抗原蛋白的细胞筛选抗体文库，在降低副作用的同时以高速度、灵敏度和准确度选择抗体，从而完成本发明。

此背景技术章节中公开的信息仅为加强对本发明背景的理解而提供，并且因此所述信息可能不包括形成对本领域技术人员而言已经清楚的现有技术的信息。

【发明内容】

本发明的一个目标是提供使用基于磁性的系统和在其表面上包含磁珠并且过表达抗原蛋白的细胞筛选抗体的方法。