[发明专利]基因治疗构建体和使用方法

说明书

本文提供了改进的基因治疗载体和使用方法，在一些实施方案中，所述基因治疗载体包含用于改进治疗性蛋白的表达和细胞靶向的序列。

交叉参考

本申请要求2018年4月30日提交的美国临时申请第62/664,741号、2018年6月22日提交的美国临时申请第62/688,640号和2018年10月10日提交的美国临时申请第62/744,068号的权益，所述美国临时申请的每一者通过引用整体并入本文中。

背景技术

遗传病症是通过发生在基因组的基因编码区中的可遗传或新生突变而发生。在一些情况下，通过施用由患有遗传病症的个体中突变的基因编码的蛋白质来治疗此类遗传病症。然而，由于蛋白质的施用并不总是导致蛋白质到达需要其的器官、细胞或细胞器，因此这种治疗具有挑战性。此外，这种治疗通常还需要每两周输注一次，而基因治疗则不需要，在基因治疗中单次治疗可以提供持久的缓解。因此，与目前可用的遗传病症的治疗相比，基因治疗有可能提供改善的结果。

发明内容

本文提供了用于使用基因治疗来治疗遗传病症的组合物和方法。本文还提供了用于基因治疗的基因治疗载体组分和方法，所述基因治疗用于改善蛋白质表达和增加细胞吸收或递送以及由基因治疗载体提供的治疗性蛋白的细胞内或亚细胞靶向。

在某些方面，提供基因治疗载体，例如包含核酸构建体的基因治疗载体，所述核酸构建体以5'至3'顺序包含：(a)翻译起始序列，和(b)编码治疗性蛋白的核酸序列。在一些实施方案中，翻译起始序列包含Kozak序列。在一些实施方案中，翻译起始序列和编码治疗性蛋白的核酸序列可以重叠，使得翻译起始序列的后三个核苷酸也是治疗性蛋白的起始密码子。在一些实施方案中，Kozak序列包含序列AX₁X₂ATGA(SEQ ID NO:28)，其中X₁和X₂中的每一者为任何核苷酸。在一些实施方案中，X₁包含A。在一些实施方案中，X₂包含G。在一些实施方案中，Kozak序列包含与AAGATGA(SEQ ID NO:29)具至少85％同一性的核酸序列。在一些实施方案中，Kozak序列与AAGATGA(SEQ ID NO:29)的序列相差一个或两个核苷酸。在一些实施方案中，Kozak序列包含AAGATGA(SEQ ID NO:29)。在一些实施方案中，Kozak序列包含与GCAAGATG(SEQ ID NO:44)具至少85％同一性的核酸序列，其中最后三个核苷酸(ATG)也是治疗性蛋白的起始密码子。在一些实施方案中，Kozak序列与GCAAGATG(SEQ ID NO:44)的序列相差一个或两个核苷酸。在一些实施方案中，Kozak序列包含GCAAGATG(SEQ ID NO:44)。在一些实施方案中，Kozak序列包含与CACCATG(SEQ ID NO:47)具至少85％同一性的核酸序列。在一些实施方案中，Kozak序列与CACCATG(SEQ ID NO:47)的序列相差一个或两个核苷酸。在一些实施方案中，Kozak序列包含CACCATG(SEQ ID NO:47)。在一些实施方案中，核酸构建体还包含编码信号肽的核酸序列，所述信号肽能够相较于无信号肽的治疗性蛋白增加治疗性蛋白的分泌。在一些实施方案中，信号肽选自结合免疫球蛋白蛋白(BiP)信号肽和Gaussia信号肽。在一些实施方案中，BiP信号肽包含与选自由SEQ ID NO:13-17组成的组的氨基酸序列具至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，信号肽与选自由SEQID No:13-17组成的组的序列相差5个或更少、4个或更少、3个或更少、2个或更少、或1个氨基酸。在一些实施方案中，BiP信号肽包含选自由SEQ ID NO:13-17组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，Gaussia信号肽包含与SEQ ID NO:32具至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，信号肽与SEQ ID NO:32的序列相差5个或更少、4个或更少、3个或更少、2个或更少、或1个氨基酸。在一些实施方案中，Gaussia信号肽包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在一些实施方案中，核酸构建体还包含内部核糖体进入序列(IRES)。在一些实施方案中，IRES为蟋蟀麻痹病毒(CrPV)IRES。在一些实施方案中，IRES包含与SEQ ID NO:12具至少90％同一性的核酸序列。在一些实施方案中，IRES包含SEQ ID NO:12。