[发明专利]从冻干球生产肺炎链球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法

权利要求书

1.一种制备组合物的方法，所述组合物包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌多糖，所述方法包括：

(a)提供第一冻干球组合物和第二冻干球组合物，所述第一冻干球组合物包含来自肺炎链球菌血清型的一种或多种活化的肺炎链球菌多糖，所述第二冻干球组合物包含载体蛋白；

(b)将一定量的所述第一冻干球组合物与一定量的所述第二冻干球组合物组合在一起，以提供具有所述一种或多种活化的多糖与所述载体蛋白的预定比率的冻干球混合物；

(c)在有机溶剂中重构所述冻干球混合物并混合以提供重构的混合物；和

(d)向所述重构的混合物中添加还原剂以生产缀合物溶液，所述缀合物溶液包含与一种或多种肺炎链球菌血清型的多糖缀合的载体蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中通过选自冻干和辐射能真空(REV)脱水的升华干燥方法制备所述第一冻干球组合物和所述第二冻干球组合物。

3.根据权利要求1所述的方法，其中通过选自冻干和辐射能真空(REV)脱水的升华干燥方法制备所述第一冻干球组合物和所述第二冻干球组合物，其包括提供第一水溶液和第二水溶液，所述第一水溶液包含来自一种或多种肺炎链球菌血清型的活化的肺炎链球菌多糖，所述第二水溶液包含载体蛋白和缓冲剂，其中所述第一水溶液和所述第二水溶液包含约0.5％或更多的蔗糖，并且将所述第一水溶液和所述第二水溶液经过升华干燥方法，以生产所述第一冻干球组合物和所述第二冻干球组合物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的组氨酸、琥珀酸盐、MES、MOPS、HEPES或乙酸盐缓冲剂。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一冻干球组合物和所述第二冻干球组合物具有小于6％的水分含量。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机溶剂是二甲基亚砜(DMSO)。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述重构在八分钟或更短时间内进行和所述混合在120分钟或更短时间内进行。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述缀合物溶液包含以重量对重量计以约0.6至约1.5的多糖与载体蛋白的比率缀合至所述载体蛋白的多糖。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述缀合物溶液包含小于所述溶液中总多糖的约15％的游离多糖量。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种多糖是从选自以下的肺炎链球菌血清型获得：血清型1、2、3、4、5、6A、6B、6C、6D、6E、6G、6H、7F、7A、7B、7C、8、9A、9L、9N、9V、10F、10A、10B、10C、11F、11A、11B、11C、11D、11E、12F、12A、12B、13、14、15F、15A、15B、15C、16F、16A、17F、17A,18F、18A、18B、18C、19F、19A、19B、19C、20A、20B、21、22F、22A、23F、23A、23B、24F、24A、24B、25F、25A、27、28F、28A、29、31、32F、32A、33F、33A、33B、33C、33D、33E,34、35F、35A、35B、35C、36、37、38、39、40、41F、41A、42、43、44、45、46、47F、47A、48、CWPS1、CWPS2和CWPS3。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述载体蛋白是选自以下的灭活的细菌类毒素：破伤风类毒素、白喉类毒素、百日咳类毒素、细菌溶细胞素或肺炎球菌溶血素。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述灭活的细菌类毒素是CRM₁₉₇。