[发明专利]从冻干球生产肺炎链球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法

说明书

描述了一种生产肺炎球菌荚膜多糖蛋白缀合物的方法，其中将特定肺炎球菌血清型的一种或多种活化的肺炎球菌多糖和载体蛋白以载体蛋白冻干球和一种或多种多糖冻干球的形式分别冻干。将预定量的载体蛋白冻干球和活化的多糖冻干球混合在一起，并将混合物在有机溶剂中重构以生产多糖载体蛋白缀合物。可以将各自包含特定血清型的多糖的多种缀合物用于生产用于疫苗的含有缀合物的组合的多价肺炎球菌免疫原性组合物。

背景技术

(1)发明领域

本发明涉及一种生产肺炎球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法，其中将特定肺炎球菌血清型的一种或多种活化的肺炎球菌多糖和载体蛋白分别以载体蛋白冻干球和一种或多种活化多糖冻干球的形式冻干。将预定量的载体蛋白冻干球和活化的多糖冻干球混合在一起，并将混合物在有机溶剂中重构以生产多糖载体蛋白缀合物。可以将各自包含特定血清型的多糖的多种缀合物用于生产用于疫苗的含有缀合物的组合的多价肺炎球菌免疫原性组合物。

(2)相关领域的描述

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是一种荚膜细菌，并且是全世界严重疾病的重要原因。1997年，美国疾病控制与预防中心(CDC)估计，美国每年有3,000例肺炎球菌脑膜炎、50,000例肺炎球菌菌血症、7,000,000例肺炎球菌中耳炎和500,000例肺炎球菌性肺炎。参见Centers for Disease Control and Prevention,MMWR Morb Mortal Wkly Rep1997,46(RR-8):1-13。此外，这些疾病的并发症可能很严重，一些研究报道，肺炎球菌脑膜炎的死亡率高达8％，神经系统后遗症高达25％。参见Arditi等，1998,Pediatrics 102:1087-97。

事实证明，已获许可多年的多价肺炎球菌多糖疫苗在预防成年人，尤其是老年人和高危人群的肺炎球菌疾病方面具有不可估量的价值。然而，婴幼儿对未缀合的肺炎球菌多糖反应较差。细菌多糖是不依赖T细胞的免疫原，在婴儿中引起微弱反应或无反应。细菌多糖免疫原与载体蛋白的化学缀合可将婴儿的免疫应答转化为一种依赖T细胞的免疫应答。白喉类毒素(DTx，DT的化学去毒版本)和CRM₁₉₇被描述为细菌多糖免疫原的载体蛋白，因为它们的氨基酸序列中存在刺激T细胞的表位。

因此，已经开发了包含与载体蛋白缀合的细菌荚膜多糖的多糖-蛋白缀合物疫苗，并且正在开发其他疫苗。已开发的缀合物疫苗的实例包括乙型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)(Hib)缀合物疫苗(例如，)以及针对肺炎链球菌(例如，和PREVNAR)和脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)(例如，)的缀合物疫苗。

多糖抗原与载体蛋白缀合后，可以纯化反应混合物，以除去不具有蛋白与其缀合的游离多糖，不具有多糖抗原与其缀合的游离载体蛋白以及低分子量多糖蛋白缀合物。纯化游离多糖、游离蛋白和低分子量缀合物的各种方法是本领域公知的，包括例如疏水性色谱法、切向超滤、渗滤等。参见，例如，国际专利申请公开号WO00/38711、美国专利号6,146,902和Lei等，2000,Dev.Biol.103:259-264。用于减少游离多糖的量的方法还包括将载体蛋白和多糖共冻干，如在美国专利号7,709,001和美国专利申请公开号20110201791中所公开的，其还显示了载体蛋白和多糖的共冻干优于载体蛋白和多糖的离散(discrete)冻干，特别是对于荚膜多糖19A。然而，共冻干不具有在不方便处理的情况下优化单个制剂和循环参数的能力以及以所需溶液规格生产载体蛋白和多糖血清型供应物的能力。

因此，对生产不含诸如游离多糖和低分子量缀合物的杂质的稳定多糖蛋白缀合物的改进方法存在持续的需求。

发明内容