[发明专利]获得源自胸腺组织的调节性T细胞的方法及所述细胞作为细胞免疫疗法在免疫系统失调中的用途

权利要求书

1.一种从分离的胸腺组织中获得调节性T(Treg)细胞群的体外方法，包括以下步骤：

a.机械分解所述胸腺组织；

b.过滤阶段(a)之后获得的产物，并将包含胸腺细胞的沉淀物重悬于培养基中；

c.从阶段(b)之后获得的产物中分离CD25+细胞；

d.在存在T细胞活化剂和IL-2的情况下在培养基中培养阶段(c)之后获得的细胞群，优选其中所述T细胞活化剂至少包含CD3和CD28激动剂；和

e.从阶段(d)的培养基中除去所述T细胞活化剂；

f.任选地，在存在IL-2的情况下在培养基中进一步培养所述调节性T细胞；

条件是在步骤(d)之前，细胞群中的CD8+细胞未被耗竭。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a)包括在存在培养基并且不使用酶的情况下机械分解所述胸腺组织。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其特征在于，步骤c)中的分离CD25+细胞包括使用与抗CD25抗体缀合的磁珠。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，阶段(d)所述的T细胞活化剂包括CD3和CD28激动剂。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，阶段(d)所述的T细胞活化剂是与人源化CD3和CD28激动剂缀合的胶体聚合物纳米基质。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(d)中培养所述细胞至少2或3天，优选至少3天。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(d)中在不存在雷帕霉素的情况下培养所述细胞。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其特征在于，阶段(e)的除去借助离心进行。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤f)中在存在IL-2的情况下再培养所述调节性T细胞1至7天，优选再培养4天。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤f)中在不存在雷帕霉素的情况下培养所述细胞。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其特征在于，所述培养基是GMP培养基。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其特征在于，所述培养基还包含抗生素，优选地为5％的抗生素。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其特征在于，所获得的Treg细胞群包含至少80％，优选至少85％，更优选至少90％的CD4+、CD25+且Foxp3+的细胞。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其特征在于，所述胸腺组织来自人。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其特征在于，所述胸腺组织来自0至16岁的人，优选地来自0至24月龄的人。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，还包括另外的步骤(g)，所述步骤(g)包括超低温保存所获得的调节性T细胞。

17.一种通过根据权利要求1至16中任一项所述的方法获得的调节性T(Treg)细胞或Treg细胞群。

18.根据权利要求17所述的Treg细胞或Treg细胞群，其特征在于，所述细胞已经经遗传修饰。