[发明专利]使用质谱鉴定免疫球蛋白

说明书

本文件涉及用于鉴定和/或定量来自生物样品的免疫球蛋白的材料和方法，其中在使用质谱进行电离和检测之前无需对免疫球蛋白进行预纯化。例如，在用含有酸和还原剂的水性缓冲液稀释含有单克隆免疫球蛋白的样品，然后将所述样品与α‑氰基‑4‑羟基肉桂酸基质(CHCA)混合之后，可以使用基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI‑TOF)质谱观察来自单克隆免疫球蛋白的单克隆轻链。在另一个实例中，在用水稀释含有单克隆免疫球蛋白的样品，然后将所述样品与CHCA基质混合后，可以使用MALDI‑TOF质谱在样品中观察到完整的单克隆免疫球蛋白。

背景

1.技术领域

本文件涉及用于鉴定和/或定量来自生物样品的免疫球蛋白的材料和方法，其中在使用质谱进行电离和检测之前无需对免疫球蛋白进行预纯化。例如，在用含有酸和还原剂的水性缓冲液稀释含有单克隆免疫球蛋白的样品，然后将所述样品与α-氰基-4-羟基肉桂酸基质(CHCA)混合之后，可以使用基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱观察来自单克隆免疫球蛋白的单克隆轻链。在另一个实例中，在用水稀释含有单克隆免疫球蛋白的样品，然后将所述样品与CHCA基质混合后，可以使用MALDI-TOF质谱在样品中观察到完整的单克隆免疫球蛋白。

2.背景信息

人免疫球蛋白含有通过二硫键结合在一起的两个相同的重链多肽和两个相同的轻链多肽。有两种不同的轻链同种型(κ和λ)和五种不同的重链同种型(IgG、IgA、IgM、IgD和IgE)。可以通过准确的分子量使用质谱仪来鉴定单克隆免疫球蛋白、多克隆免疫球蛋白以及来自单克隆免疫球蛋白或多克隆免疫球蛋白的轻链和/或重链的任何组合。

通过质谱检测和监测免疫球蛋白是本领域众所周知的。

例如，WO2015/154052A和WO2014/150170公开了在液相色谱和ESI-Q-TOF四极杆飞行时间质谱分析之前，使用Melon凝胶(Melon Gel)从血清样品中富集免疫球蛋白。WO2015/154052A类似地用LC-ESI-Q-TOF质谱使用Melon凝胶纯化。Barnidge D.R.等人(J.Neuroimmunology(2015),285,123-126)也描述了从血清样品中富集免疫球蛋白。然后在通过LC-MS分析之前，使用DTT(二硫苏糖醇)还原纯化的血清样品。

Mills等人(Clin.Chem.(2016)62(10)1334-1344)描述了在MALDI-TOF之前使用针对重链恒定区或轻链恒定区的骆驼科动物源的纳米抗体来纯化抗体。

这些实例表明，常规地，抗体在通过质谱分析之前被纯化或富集的。

在质谱(M.S.)之前免疫球蛋白的复杂纯化或富集增加了研究样品中免疫球蛋白的时间。

Hortin G.L.和Remaley A.T.(Clin.Geonomics(2006)103-114)描述了主要血浆蛋白和血清样品的质量测定。样本用含有10mmol/L乙酸铵和10g/L芥子酸(sinapinicacid)的40％丙烯腈/10％乙醇/50％水/0.1％三氟乙酸稀释。

分析了多种纯化的蛋白质，其包括糖蛋白、转铁蛋白、免疫球蛋白G、载脂蛋白和甲状腺素运载蛋白。

两个样本的稀释血清样品能够鉴定IgG、白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白和载脂蛋白。该论文的结论是对于质量小于30,000的几种最丰富的蛋白质(即，排除例如质量为147,000的IgG)，可以以足够的精度和准确性进行质量测量，以允许检测化学修饰和序列修饰。该论文还指出，在没有分级的复杂混合物的分析中存在缺陷。首先，只能观察到最丰富的成分。其次，高蛋白和盐浓度通常抑制信号。观察到白蛋白干扰检测其它峰(m/z为30,000)的能力。该论文的结论是应使用IgG和白蛋白的选择性消耗。没有公开其它免疫球蛋白或实际上轻链的鉴定。

存在许多与抗体产生细胞相关的增生性疾病。