[发明专利]用于重组蛋白的更高表达的前导序列

权利要求书

1.一种用于生产胰岛素和胰岛素类似物的方法，包括式1的前胰岛素原：

R₁-X₁-X₂-X₃

式1

作为中间体，其中，X₁是胰岛素或胰岛素类似物的‘B’链，X₂是选自RR或KR或RK或KK的二肽，X₃是胰岛素或胰岛素类似物的‘A’链，以及R₁是前导肽序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述前导肽选自：

a)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的肽，

b)具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的肽，

c)包括以下氨基酸序列的肽：MSRIVINAYAKATQP；

d)包括以下氨基酸序列的肽：MEKHTKDQIIEAPHM；或

e)与a)、b)、c)或d)具有至少80％同源性的肽。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括由前胰岛素原制备式2：X₁-X₂-X₃的胰岛素原，其中，X₁是胰岛素或胰岛素类似物的‘B’链，X₂是选自RR或KR或RK或KK的二肽，以及X₃是胰岛素或胰岛素类似物的‘A’链。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述方法包括通过在生产培养基中培养包括编码可操作地连接至所述前导肽的胰岛素原的核酸的原核宿主细胞来表达胰岛素原。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述原核宿主细胞选自假单胞菌细胞或大肠杆菌细胞。

6.根据权利要求4所述的方法，其中，所述生产培养基包括1％酵母提取物、1％葡萄糖、0.3％KH₂PO₄、1.25％K₂HPO₄、0.5％(NH₄)₂SO₄、0.05％NaCl、0.1％MgSO₄·7H₂O和0.1％的痕量金属溶液(FeSO₄、ZnSO₄、CoCl₂、NaMoO₄、CaCl₂、MnCl₂、CuSO₄或H₃BO₃于盐酸中)、卡那霉素(20μg/ml)每100ml。

7.一种多肽，包括可操作地连接至胰岛素或胰岛素类似物的前体的前导肽，其中，所述前导肽选自：

a)具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的肽，

b)具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的肽，

c)包括以下氨基酸序列的肽：MSRIVINAYAKATQP；

d)包括以下氨基酸序列的肽：MEKHTKDQIIEAPHM；或

e)与a)、b)、c)或d)具有至少80％同源性的肽。

8.根据权利要求7所述的多肽，其中，所述胰岛素或胰岛素类似物的前体是式2：X₁-X₂-X₃的胰岛素原，其中，X₁是胰岛素或胰岛素类似物的‘B’链，X₂是选自RR或KR或RK或KK的二肽，以及X₃是胰岛素或胰岛素类似物的‘A’链。

9.根据权利要求7所述的多肽，其中，所述前导肽指导所述胰岛素和胰岛素类似物在原核宿主细胞中的表达。

10.根据权利要求7所述的多肽，其中，所述原核宿主细胞选自假单胞菌细胞或大肠杆菌细胞。