[发明专利]单细胞分析的微流控方法

权利要求书

1.一种在微流体系统中检测目标化合物的方法，该方法包括以下步骤：

a.在所述微流体系统中产生至少一个液滴，所述至少一个液滴包括：

i.至少一个单细胞，

ii.一种或多种第一捕获剂，其中所述一种或多种第一捕获剂能够结合所述单细胞以及所述目标化合物，

iii.包含标记的一种或多种第二捕获剂，其中所述一种或多种第二捕获剂能够结合所述目标化合物，

b.培养能够产生可检测事件的所述至少一个液滴，

c.对所述至少一个液滴进行直接检测，

其中，所述可检测事件在所述至少一个液滴中的存在或重新定位确定所述目标化合物的存在，

其中所述至少一个单细胞在液滴中呈现出迁移自由度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种第一捕获剂在产生至少一个单个液滴之前或之后结合所述至少一个单细胞的表面。

3.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述一种或多种第一捕获剂以10¹至10⁸分子/细胞的密度结合所述单细胞。

4.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中，在所述液滴中以10pM至100μM的浓度产生所述目标化合物。

5.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中，所述液滴的体积为2pL至10nL。

6.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括在培养后测量液滴中的细胞存活的步骤。

7.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述标记选自荧光标记、基于氨基酸的标记或基于核酸的标记或条形码标记。

8.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述第一捕获剂和所述第二捕获剂独立地选自蛋白质、肽、寡核苷酸、核酸、荧光缀合物、酶共轭物、合成聚合物或其组合。

9.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中所述第一捕获剂是抗体，而所述第二捕获剂是目标抗体的荧光抗化合物。

10.根据权利要求9的所述方法，其中所述第一捕获剂是双功能抗体。

11.根据权利要求1和2中任一项所述的方法，其中，所述目标化合物是细胞分泌的化合物。

12.根据权利要求1和2中任一项的方法在监测生物事件中的用途。

13.根据权利要求12所述的方法的用途，其中所述生物事件是免疫应答或其调节。

14.一种用于检测液滴中的目标化合物的方法，该方法包括以下步骤：

a.提供一种微流体系统，其包括：

i.至少一个入口，

ii.至少一个出口，

iii.一个或多个通道，

b.在所述微流体系统中注入液滴流，其中至少一个液滴包括：

i.至少一个单细胞

ii.能够结合所述单细胞以及所述目标化合物的多个第一捕获剂，和

iii.多个第二捕获剂，每个第二捕获剂包含标记，其中所述多个第二捕获剂能够结合所述目标化合物，

c.在允许产生目标化合物的条件下培养所述多个液滴，从而如果目标化合物是由单细胞产生的，所述目标化合物将被所述多个第一捕获剂和所述多个第二捕获剂捕获，

d.通过检测所述标记的存在或重新定位来确定目标化合物的存在，

其中所述至少一个单细胞在液滴中具有迁移自由度。

15.一种微流体系统，其包括：

a.至少一个入口，

b.至少一个出口，

c.一个或多个通道，

d.用于创建至少一个液滴的模块，所述至少一个液滴包括：

i.一个或多个单细胞，

ii.能够结合所述单细胞以及目标化合物的第一捕获剂，

iii.包含标记的第二捕获剂，能够结合所述目标化合物，

e.检测模块，其检测包含产生所述目标化合物的细胞的液滴，和

f.分析模块，其被配置为用于信号的分析，

其中所述至少一个单细胞在液滴中具有迁移自由度。