[发明专利]植物材料分类方法

说明书

本文描述了一种用于将一批植物材料分类为受污染或未受污染的方法，包括：(i)由所述一批植物材料提供多核苷酸样品；(ii)使所述多核苷酸样品与一种或多种扩增引物接触，以扩增与不育性相关联的靶多核苷酸序列；(iii)对所述样品执行体外多核苷酸扩增反应，以生成一种或多种扩增产物；(iv)确定所述一种或多种扩增产物的大小或序列；以及(v)基于在步骤(iv)中确定的所述一种或多种扩增产物的大小或序列，将所述一种或多种扩增产物的大小或序列与来自已知不育性遗传来源的已知的一种或多种扩增产物的大小或序列进行比较；其中如果步骤(v)中确定的所述不育性遗传来源与所述一批植物材料的预期的不育性遗传来源相对应，则认为所述一批植物材料是未受污染的；或者其中如果步骤(v)中确定的所述不育性遗传来源与所述一批植物材料的所述预期的不育性遗传来源不对应，则认为所述一批植物材料是受污染的。

技术领域

本公开总体上涉及将一批植物材料分类为受污染的或未受污染的。该分类基于对与不育性相关联的一种或多种多核苷酸序列的分析。通过执行本文所述的方法，可以确定某批次或分批的植物材料是受污染的还是未受污染的，以确保植物材料的质量或完整性。特别地，本公开使得可以易于确定一批植物材料是否已经被掺杂。

背景技术

商业上准备的烟草种子出售给农民，供他们种植烟草植物。为了确保所生产的烟草的质量，通常期望种子的生产者能够测试烟草植物或由其衍生的烟草产品，以检查其来源于提供给农民的烟草种子。种子生产者还期望能够检查所出售的烟草植物或烟草产品没有被来自其他种源的烟草污染或掺杂，是完全由供应的种子获得的。这有助于确保烟草植物或由其衍生的烟草产品的质量。例如，包含来源于已出售给农民的商业上准备的烟草种子以外的任何烟草种子的烟草的烟草批次或分批可能质量低劣，因而可能必须丢弃。

本领域中需要可以用于检查植物材料(诸如烟草材料)或由其衍生的产品的质量或掺杂的测试。特别地，本领域中需要可以在适合于高通量分析的植物产品生产的任何阶段使用的简化方法。

发明内容

商业上准备的烟草种子通常以非可育形式出售。细胞质雄性不育性 (CMS)是生产用于商业用途的非可育烟草植物的主要方式，并且是不育性的常见遗传来源。CMS是经由回交将普通烟草(Nicotiana tabacum)核基因组转移到同一属的物种的细胞质中而产生的。在商业上，最丰富的不育性来源是来源于香甜烟草(Nicotiana suaveolens)细胞质或粉蓝烟草(Nicotiana glauca)细胞质的。本公开提供了通过分析至少一种(或仅一种)在即将经受分析的植物物种或品种之间具有多态性的多核苷酸序列，使得能够易于将可育植物材料与不育植物材料区分开的方法，所述植物物种或品种至少诸如普通烟草、香甜烟草和粉蓝烟草。如果分析结果指示植物材料的育性不符合预期，则表明植物材料已经被污染或被掺杂，并且例如是不合格的。这种区分可以实现，原因是某些植物物种中的与不育性相关联的某些多核苷酸序列在其中具有不同的多态性(例如，缺失或添加)，使得每个扩增的多核苷酸序列的大小或序列的差异允许鉴定这些多核苷酸序列所来源的物种。在某些实施方案中，可以将普通烟草细胞质(可育材料)与香甜烟草细胞质(不育材料)或粉蓝烟草细胞质(不育材料)区分开。根据该分析的结果，如果不育性的遗传来源与正在测试的这批植物材料的预期的不育性遗传来源相对应，则认为这批植物材料是未受污染的或未掺杂的(例如，合格的)，因为没有迹象表明该植物材料已经被含有不同的不育性遗传来源的植物材料污染。如果不育性的遗传来源与这批植物材料的预期的不育性遗传来源不对应，则认为这批植物材料是受污染的或掺杂的(例如，不合格的)，因为有迹象表明该植物材料已经被含有不同的不育性遗传来源的植物材料污染或掺杂。在一些情况下，不育性的遗传来源可能与这批植物材料的预期的不育性遗传来源不对应，因为不育性的遗传来源是不可检测的。如果发现这批植物材料是未受污染的(例如，合格的)，则可以预期该植物材料免于污染或掺杂，并且由其衍生的植物材料将具有预期的质量或纯度。如果发现这批植物材料是受污染的或掺杂的(例如，不合格的)，则可以预期该植物材料已经被其他植物材料污染，并且由其衍生的植物材料将不具有预期的质量或纯度。在这种情况下，由于无法保证该植物材料的质量或纯度，可能需要将其丢弃或销毁。