[发明专利]CAR NK细胞

说明书

本发明涉及制造用慢病毒载体遗传修饰的自然杀伤(NK)细胞的领域，这些慢病毒载体携带编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸。本发明进一步涉及用方法获得的CAR‑NK细胞，和这些CAR‑NK细胞在医学中、特别是用于在治疗癌症的方法中的用途。

技术领域

本发明涉及制造用慢病毒载体遗传修饰的自然杀伤(NK)细胞的领域，这些慢病毒载体携带编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸。本发明进一步涉及CAR-NK细胞，和这些CAR-NK细胞在医学中、特别是用于治疗癌症中的用途。

背景技术

本发明集中于开发自然杀伤细胞的制造方法，这些自然杀伤细胞是用携带至少一种编码CAR的多核苷酸的慢病毒载体遗传修饰的自然杀伤细胞(CAR-NK细胞)。本发明的制造方法允许获得以NK细胞和CAR的治疗效果之间的有效协同作用为特征的细胞群体。

自然杀伤细胞(NK细胞)是具有高抗肿瘤、抗病毒和抗微生物活性的先天性免疫系统的细胞。在报道了NK细胞在患有癌症的患者中的成功过继性转移和体内扩增后，将NK细胞用于治疗癌症引起了关注[Ruggeri等人(2005)CurrOpin Immunol[免疫学当前观点]17:211-7；Ren等人(2007)Cancer BiotherRadiopharm[癌症生物治疗和放射药物]22:223-34；Koehl等人(2004)Blood Cells Mol Dis[血细胞分子和疾病]33:261-6.176；Passweg等人(2004)Leukaemia[白血病]18:1835-8]。通常，在这些研究中，供体NK细胞输注的耐受性良好且没有诱导GvHD的证据。然而，迄今为止，在患有癌症的患者中，只进行了少数研究过继性NK细胞输注的试验。主要障碍是仅相对少量NK细胞可以从常规白细胞去除术产物分离。这妨碍了患有癌症的人中NK细胞剂量依赖性抗肿瘤应答的临床试验[Klingemann等人(2004)Cytotherapy[细胞疗法]6:15-22；Passweg等人(2006)Best Pract Res ClinHaematol[临床血液学最佳实践和研究]19:811-824；McKenna等人(2007)Transfusion[输液]47:520-528；Koehl等人(2005)KlinPadiatr[小儿科杂志]217:345-350；Iyengar等人(2003)Cytotherapy[细胞疗法]5:479-484；Meyer-Monard等人(2009)Transfusion[输液]49:362-371]。因此，正在研究的用于扩增和激活NK细胞的离体方案，使得能够实现更高NK细胞剂量的临床试验，并且允许多次NK细胞输注[Carlens等人(2001)Hum Immunol[人类免疫学]62:1092-1098；Barkholt等人(2009)Immunotherapy[免疫疗法]1:753-764；Berg等人(2009)Cytotherapy[细胞疗法]11:341-355；Fujisaki等人(2009)Cancer Res[癌症研究]69:4010-4017；Siegler等人(2010)Cytotherapy[细胞疗法]12(6):750-63]。然而，大多数方案通过使用支持性饲养细胞系来处理技术缺点，这些支持性饲养细胞系对于大规模和多中心试验而言会导致产生NK细胞产物的调控问题。先前，我们已经描述了具有以高细胞数目、高纯度和功能性从CD34+造血干细胞产生临床相关的NK细胞产物的能力的替代性基于细胞因子的培养方法[Spanholtz等人(2010)PLoS One[公共科学图书馆综合]5:e9221]。我们已经进一步优化了CD34+的富集，并且开发了导致高产率激活的CD34+细胞来源的NK细胞的可扩展程序。

嵌合抗原受体(CAR)是识别在靶细胞上表达的特定蛋白质或抗原的重组受体。一旦CAR在T淋巴细胞中表达(则被称为CAR-T细胞)或免疫系统的其他细胞中表达，就能够针对表达其结合的抗原的所有细胞重定向特异性免疫应答。CAR研究最广泛的临床应用是癌症免疫疗法，该癌症免疫疗法包括输注携带靶向肿瘤抗原的CAR的免疫系统的细胞，例如T细胞或NK细胞。此类细胞能够针对表达由CAR靶向的抗原的细胞产生强抗肿瘤应答(Sadelain等人,Cancer Discovery[癌症发现].2013.3(4):388-98)。