[发明专利]成熟的气道类器官、其制备方法和用途

权利要求书

1.产生近端分化的气道类器官(PD类器官)的方法，其包括将气道类器官(AO类器官)在近端分化培养基中培养足以产生PD类器官的时间段，所述PD类器官包含由至少25％，至少30％，至少35％或至少40％纤毛细胞组成的细胞群，其中所述纤毛细胞的特征在于FOXJ1和SNTN表达。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述近端分化培养基补充有notch抑制剂。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述notch抑制剂为γ-分泌酶抑制剂，诸如DAPT或二苯并氮卓(DBZ)或苯二氮卓(BZ)或LY-411575。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述notch抑制剂为DAPT，其浓度优选为5至30μM，优选为10至20μM，或更优选为约10μM。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述近端分化培养基包含一种或多种如表2中所示的组分，任选地以表2中所示的浓度。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述近端分化培养基包含至少EGF、胰岛素、转铁蛋白、氢化可的松、三碘甲状腺氨酸和肾上腺素。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述近端分化培养基还包含牛血清白蛋白和/或牛垂体提取物。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述近端分化培养基为补充有notch抑制剂的PneumaCult-ALI培养基(StemCellTechnologies)。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述方法在近端分化培养基中培养所述AO类器官之前，还包括以下步骤中的一个或多个：

a.从受试者获得肺组织样品；

b.从肺组织样品中获得离解的细胞；以及

c.在AO类器官形成阶段中培养肺细胞足以产生AO类器官的时间段。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述AO类器官形成阶段包括在AO类器官培养基中培养细胞，所述AO类器官培养基包含一种或多种如表1中所示的组分，任选地以表1中所示的浓度。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述AO类器官包含至少R-spondin、BMP抑制剂、TGF-β抑制剂、FGF和heregulinβ-1。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述培养肺细胞和/或AO类器官的步骤包括培养与外源性细胞外基质(诸如基底膜提取物或Matrigel^TM)接触的细胞。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述AO类器官为3D类器官。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述PD类器官为3D类器官。

15.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述PD类器官为2D类器官。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述在近端分化培养基中培养的步骤包括在包含顶端室和基底室的transwell培养系统中培养。