[发明专利]稳定化的透明质酸

说明书

包含交联透明质酸的无菌水凝胶组合物，其中相对于透明质酸的总量，分子量小于200kDa的可提取的透明质酸的量小于15重量％。

本发明涉及包含交联透明质酸的无菌水凝胶组合物和用于作为软组织填充物的该组合物。

背景技术

透明质酸(Hyaluronan，缩写为HA，也称为hyaluronic acid)是天然存在的具有由D-葡糖醛酸和N-乙酰基-D-葡糖胺构成的重复二糖单元的多糖。术语透明质酸(hyaluronan或hyaluronic acid)通常与其盐(例如透明质酸钠)同义地使用。

高分子量的透明质酸天然存在于皮肤中，并以其粘弹性特性和非常高的吸水性而著称。其性质在很大程度上促进了皮肤的弹性。鉴于其性质及其生物相容、耐受和无毒的特性，已经在医学和美容领域，特别是在美容手术的许多应用中利用该化合物的优点超过10年。例如，透明质酸被用于通过直接注射到所考虑区域的真皮中来填充皱纹(用作皮肤填充物)。

生物发酵来源的高度纯化的未修饰的透明质酸具有极好的生物相容性，并且与内源性透明质酸相同。然而，透明质酸尽管具有与人体组织高度相容、与水具有高亲和力并且发挥强力保湿功能的优点，但是其不具有足够的生物力学性质。当将透明质酸注射到皮肤组织中时，其通过人体组织中存在的透明质酸酶(酶降解)和自由基(化学降解)在体内迅速降解。

已经提出了许多解决方案来减慢透明质酸在体内的降解并改变其化学、物理和生物学性质，另外提供制剂对储存过程中的降解、对热以及因此对灭菌的提高的抗性。

这些方法通常涉及透明质酸的化学修饰，包括例如通过化学、酶促或光化学方法使透明质酸交联。这些交联透明质酸凝胶可以通过多种制备方法获得。通常，这些方法需要两个主要步骤，第一步由使透明质酸水合以使其转化为水溶液组成，并且第二步旨在在能够诱导其交联的试剂(也称为“交联剂”)的存在下使所述水溶液的透明质酸分子交联。交联剂的实例包括甲醛、二乙烯基砜、双碳二亚胺和环氧化物。其它解决方案包括用诸如多肽的大基团对透明质酸进行修饰，以诱导细胞附着或自组装成水凝胶。

为了生产皮肤填充物，交联剂最通常选自环氧化物如丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)或1,2,7,8-二环氧辛烷(DEO)、醛、或聚乙烯基砜如二乙烯基砜(DVS)，因此本质上是合成的。

遗憾的是，透明质酸的化学修饰会导致利用天然具有低免疫原性并且没有毒性的未修饰的透明质酸时未观察到的副作用和异物反应。在大多数市售的透明质酸软组织填充物中，BDDE被用作交联剂。由于BDDE中存在的环氧基的反应性质，软组织填充物中残留的未反应BDDE可能具有遗传毒性作用。因此，必须将皮肤填充物中的BDDE保持在痕量(百万分之2)，因此在生产过程中需要昂贵的额外纯化和测试程序。尽管BDDE交联填充物的安全性特性得到了长期临床经验的支持(De Boulle,Glogau等人,2013,A review of themetabolism of 1,4-butanediol diglycidyl ether-crosslinked hyaluronic acidsoft tissue fillers,Dermatol Surg(39):1758-1766)，BDDE仍可能引起一些安全性担忧(Choi,Yoo等人,2015,Modulation of biomechanical properties of hyaluronic acidhydrogels by crosslinking agents,J Biomed Mater Res Part A(103A):3072-3080)。

由于与BDDE相关的遗传毒性风险，可能对患者终生施用的市售皮肤填充物产品(例如)的年剂量被限制为每年20ml。市售皮肤填充物产品的施用被限制为每次施用6ml的体积。类似的限制适用于包含DVS交联的透明质酸的软组织填充物。