[发明专利]进行性骨化性纤维发育不良的啮齿类动物模型

说明书

本发明提供了包含经修饰的Acvr1基因的经遗传修饰的啮齿类动物，所述基因包含侧翼为位点特异性重组酶识别位点、处于反义方向的编码R258G的条件改变的外显子7，其中所述改变的外显子在重组酶作用下被倒位为有义方向，导致异位骨形成。

相关申请的变叉引用

本申请要求于2018年6月13日提交的美国临时申请号62/684,582、以及于2019年4月3日提交的美国临时申请号62/828,532的优先权权益，所述美国临时申请的全部内容以引用的方式并入本文。

技术领域

本公开内容涉及经遗传修饰的啮齿类动物和人疾病的啮齿类动物模型。更具体而言，本公开内容涉及其基因组包含经修饰的啮齿类动物Acvrl基因的经遗传修饰的啮齿类动物；显示出进行性骨化性纤维发育不良(FOP)的表型特点，例如异位骨形成的啮齿类动物；其基因组包含经修饰的啮齿类动物Acvrl基因的经分离的啮齿类动物组织和细胞；包含经修饰的啮齿类动物Acvrl基因的经分离的核酸；制备经遗传修饰的啮齿类动物的组合物和方法；育种方法；以及使用经遗传修饰的啮齿类动物的方法。

以引用的方式并入的序列表

4KB的命名为36190_10461US01__SequenceListing.txt，于2019年6月6日创建，并且经由EFS-Web提交给美国专利及商标局(United States Patent and TrademarkOffice)的ASCII文本文件中序列表，以引用的方式并入本文。

背景技术

在说明书自始至终引用了各种出版物，包括专利、专利申请、公开的专利申请、登录号、技术文章和学术文章。这些引用的出版物各自整体且为了所有目的以引用的方式并入本文件中。

Acrvl是骨形态发生蛋白(BMP)的I型受体。人ACVRl基因中的某些突变，包括引起氨基酸修饰R206H或R258G的突变，与疾病进行性骨化性纤维发育不良(FOP)强相关(参见例如，美国专利申请公开号2009/0253132；Pignolo，R.J.(2011)Orphanet Journal of RareDiseases，6：80，1-6；以及Kaplan等人，Am J Med Genet A.2015；167(10)：2265-2271)。在Acvrl中携带R206H突变的嵌合小鼠发展FOP样表型(参见例如，Chakkalakal等人(2012)J.Bone and Mineral Res.27：1746-1756)。Acvrl基因中的某些突变，例如导致R206HAcvrl蛋白变体的突变，在小鼠中是围产期致死的，并且对通过啮齿类动物的种系传递包含该突变的敲入基因提出了挑战。

发明内容

本公开内容涉及经遗传修饰的啮齿类动物，其在其种系中包括包含经修饰的啮齿类动物Acvrl基因的核酸序列。

本发明提供了经遗传修饰的啮齿类动物，其在其种系中包括包含经修饰的啮齿类动物Acvrl基因的核酸序列，其中经修饰的啮齿类动物Acvrl基因包含啮齿类动物Acvrl基因的条件性改变，其中所述改变致使啮齿类动物易受异位骨形成影响。

本发明提供了经遗传修饰的啮齿类动物，其在其种系中包括包含经修饰的啮齿类动物Acvrl基因的核酸序列，所述基因包含条件改变的Acvrl外显子，其中所述条件改变的Acvrl外显子的表达诱导对啮齿类动物赋予对异位骨形成的易感性。在一个实施例中，改变的Acvrl外显子是外显子7。在一个具体实施例中，改变的Acvrl外显子7包括导致Acvrl蛋白中的R258G氨基酸变异的改变。