[发明专利]用于测序的引物寡核苷酸

权利要求书

1.方法，其包括：

提供固体表面，结合至所述固体表面且具有游离3’末端的表面寡核苷酸，和结合至所述固体表面且具有游离3’末端的模板多核苷酸，其中所述模板多核苷酸的游离3’末端的至少一部分被配置为与所述表面寡核苷酸的至少一部分杂交，从而可通过利用所述模板多核苷酸作为模板延伸所述表面寡核苷酸来合成拷贝多核苷酸；

提供测序寡核苷酸，其中所述测序寡核苷酸以比所述表面寡核苷酸更大的亲和力与所述模板多核苷酸的游离3’末端的至少一部分杂交；以及

利用所述模板多核苷酸作为模板延伸所述测序寡核苷酸。

2.权利要求1的方法，其中所述表面寡核苷酸的核苷酸序列与所述测序寡核苷酸的至少一部分相同。

3.权利要求1或2的方法，其中所述测序寡核苷酸包含经修饰的核苷酸，相对于天然核苷酸，所述经修饰的核苷酸增强碱基对与所述模板多核苷酸的核苷酸的结合。

4.根据权利要求3的方法，其中所述经修饰的核苷酸是锁核苷酸或桥连核苷酸。

5.权利要求3的方法，其中所述测序寡核苷酸包含多个经修饰的核苷酸，相对于天然核苷酸，所述经修饰的核苷酸增强碱基对与所述模板多核苷酸的核苷酸的结合。

6.权利要求5的方法，其中所述测序寡核苷酸的10％或更多的核苷酸是经修饰的核苷酸。

7.权利要求5或6的方法，其中所述测序寡核苷酸的50％或更少的核苷酸是经修饰的核苷酸。

8.权利要求5至7中任一项的方法，其中所述表面寡核苷酸的核苷酸序列与所述测序寡核苷酸的一部分相同，并且其中所述经修饰的核苷酸包含于与所述表面核苷酸具有相同序列的所述测序寡核苷酸的部分中。

9.前述权利要求中任一项的方法，其中延伸所述测序寡核苷酸是用于测序所述模板多核苷酸的一部分的过程中的步骤。

10.权利要求9的方法，其中所述测序过程测序所述模板多核苷酸的第二索引序列。

11.权利要求10的方法，其进一步包括使索引引物与所述模板多核苷酸杂交，并利用所述模板多核苷酸作为模板延伸所述索引引物，以测序所述模板多核苷酸的第一索引序列，其中所述第一索引序列不同于所述第二索引序列。

12.权利要求11的方法，其中所述使索引引物与模板多核苷酸杂交并延伸索引引物以测序第一索引序列发生在测序所述第二索引序列之前。

13.前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括使第一读段引物与所述模板多核苷酸杂交，并利用所述模板多核苷酸作为模板延伸所述第一读段引物，以测序所述模板多核苷酸的第一读段序列。

14.从属于权利要求11的权利要求13的方法，其中所述使第一读段引物与模板多核苷酸杂交并延伸第一读段引物以测序第一读段序列发生在测序所述第一索引序列之后。

15.从属于权利要求11的权利要求13的方法，其中所述使第一读段引物与模板多核苷酸杂交并延伸第一读段引物以测序第一读段序列发生在测序所述第一索引序列和所述第二索引序列之后。

16.前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括通过利用所述模板多核苷酸作为模板延伸所述表面寡核苷酸来合成所述拷贝多核苷酸。

17.权利要求16的方法，其中所述通过延伸表面多核苷酸合成拷贝多核苷酸发生在测序所述第一索引序列、所述第二索引序列和所述第一读段序列之后。