[发明专利]用于分离心肌细胞群的方法

说明书

本申请尤其涉及样品中的心肌细胞的鉴定、分离和/或纯化。用于从异质分化细胞群中分离心肌细胞群的方法包括：(a)使样品与至少一种试剂接触，该试剂与至少一种心肌细胞表面标记物特异性结合，该心肌细胞表面标记物选自JAK2、DDR2、ACVRL1、CD200、SRPX、PRKACB、MST1R、P2RX1、TNFRSF10A、CHRND、KIAA0319、CD274、CCRL2、MBL2、ADORA和CD181；以及(b)分离与所述试剂结合的细胞。优选的实施例包括使样品与第一试剂接触以提供心室心肌细胞以及与第二试剂接触以提供心房心肌细胞，该第一试剂与选自JAK2、DDR2、ACVRL1、CD200、SRPX、PRKACB和MST1R的细胞表面标记物特异性结合，该第二试剂与选自P2RX1、TNFRSF10A、CHRND、KIAA0319、CD274、CCRL2、MBL2、ADORA3和CD181的细胞表面标记物特异性结合。另一实施例涉及分离的心肌细胞群在治疗心血管疾病或病症中的用途。

技术领域

本发明涉及样品中的心肌细胞的纯化。

背景技术

心血管疾病(CVD)仍然是全球范围内主要的死亡原因。由心血管疾病引起的心脏损害导致功能逐渐丧失和生活质量下降。鉴于我们目前无法产生新的功能性心脏组织或使用外部装置模仿心脏的活动，因此，心脏损伤比任何其他器官的损伤尤其更使人衰弱。由多方面事件引起的心血管疾病可导致不利的后果，包括形成纤维化疤痕组织以及降低通向心脏的血管的扩张能力。由此造成的血流和血压超负荷导致对心肌细胞的不可逆转的损害、心力衰竭并最终死亡。

几十年来，使用基于药物或基于装置的疗法来治疗CVD(例如心律不齐)已充满了与副作用相关的无效或不足的困难。这激发了基于干细胞疗法的最新进展和研究。例如，产生人多能干细胞(hPSC)衍生的心肌细胞旨在创建用于识别心血管疾病的遗传变异的平台，该平台在体外准确地重演疾病表型。最近，用于心血管疾病的干细胞疗法的进展突显了使用干细胞疗法通过修复或再生受损的心脏组织来提供功能性心肌细胞的无限供应以恢复心脏功能的潜力(Hotkar和Balinsky，2012)。虽然较早的研究已经报道了基于细胞的疗法的益处，可改善动物模型的心脏功能(Cambria等，2017)，但由于目前可用的细胞表面标记物对于纯化特定的心肌细胞亚群(心房、心室或起搏点)通常是非特异性的，我们质疑组织植入后是否仍会发生与组织排斥或心律不齐相关的并发症的风险。

尽管干细胞疗法为基于细胞的疗法提供了新的收入，以替代因疾病和年龄^1,2而受损的心脏组织，但在体外使用混合细胞群可能会带来问题，因为污染的群可能影响疾病转归以及改变用于转化医学中的心血管移植物的效果。

先前已有报道，SIRPA可用作用于分离衍生自人多能干细胞的心肌细胞的特异性细胞表面标记物(Dubois等，Nat.Biotechnol.2011)。然而，仅SIRPA无法区分特定的心肌细胞群，如心室心肌细胞和心房心肌细胞。特定心肌细胞亚群的纯化是重要的，尤其是对基于细胞的疗法而言，因为心肌细胞亚群表现出不同的电生理性质。

发明内容

这样，本发明试图鉴定对心肌细胞亚群特异的细胞表面标记物，并随后证明可以使用这些特异性细胞外标记物来分离和纯化心房心肌细胞或心室心肌细胞。因此，本发明能够纯化特定的心肌细胞亚群，其可用于针对患者心脏的特定区域并减少由心律不齐引起的并发症的基于细胞的疗法。

在本申请文件中对显然是先前公开的文件的列举或讨论不应被视为承认该文件是现有技术的一部分或是公知常识。

在本文中引用的任何文件均通过引用其全文而并入本文。

本发明涉及用于分离心房心肌细胞或心室心肌细胞的特异性细胞表面标记物。