[发明专利]用于通过降低内源性蛋白质的水平来改善生物产物的生产的方法

权利要求书

1.一种在细胞，例如，生产细胞中制造产物，例如，重组多肽的方法，所述方法包括：

降低所述细胞，例如，生产细胞中的内源性蛋白质的水平，

从而制造所述产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是生产细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其进一步包括在适合于生产所述产物，例如，重组多肽的条件下培养所述细胞。

4.根据任一前述权利要求所述的方法，其进一步包括提供细胞，例如，生产细胞。

5.一种在细胞，例如，生产细胞中制造产物，例如，重组多肽的方法，所述方法包括：

提供细胞，例如，生产细胞，

降低所述细胞，例如，生产细胞中的内源性蛋白质的水平，和

在适合于生产所述产物，例如，重组多肽的条件下培养所述细胞，

从而制造所述产物。

6.根据任一前述权利要求所述的方法，其进一步包括例如通过本文所述或本领域已知的方法收获所述产物，例如将所述产物与所述生产混合物分离和/或提供纯化的产物制剂。

7.一种制造细胞，例如，生产细胞的方法，所述方法包括：

降低所述细胞，例如，生产细胞中的内源性蛋白质的水平，

其中所述细胞，例如，生产细胞能够表达产物，例如，重组多肽。

8.根据权利要求7所述的方法，其进一步包括提供细胞，例如，生产细胞。

9.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内源性蛋白质是非必需蛋白质(例如，其中所述蛋白质的水平的降低或完全丧失不会显著有害地影响细胞活力或产物生产)。

10.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内源性蛋白质是细胞外蛋白质。

11.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内源性蛋白质是分泌性蛋白质。

12.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内源性蛋白质定位到高尔基体(Golgiapparatus)。

13.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内源性蛋白质定位到内质网(ER)。

14.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内源性蛋白质是冗余蛋白质(例如，其中所述蛋白质的功能或活性与所述细胞中存在的另一种内源性蛋白质的功能或活性显著(例如，部分或完全)重叠)。

15.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内源性蛋白质是通过实例1所述的方法标识和/或选择，例如通过与表E1的关键词相关联、不与表E2的关键词相关联，和/或预测是分泌性蛋白质。

16.根据任一前述权利要求所述的方法，其中所述内源性蛋白质是选自表E5。

17.根据任一前述权利要求所述的方法，其中降低一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或更多种(例如，二十种或更多种)内源性蛋白质的水平。

18.根据任一前述权利要求所述的方法，其中降低由表E6中列出的基因组合中的一个、两个或三个基因编码的内源性蛋白质的水平。

19.根据任一前述权利要求所述的方法，其中降低所述细胞中的内源性蛋白质的水平包括从所述细胞的基因组消除，例如，敲除编码所述内源性蛋白质的所述基因或可操作地偶联到编码所述内源性蛋白质的所述基因的调控核酸序列，例如，启动子或增强子的拷贝。