[发明专利]用于通过降低内源性蛋白质的水平来改善生物产物的生产的方法在审
申请号: | 201980046173.8 | 申请日: | 2019-07-12 |
公开(公告)号: | CN112424339A | 公开(公告)日: | 2021-02-26 |
发明(设计)人: | R·杨;P·M·奥卡拉汉;D·詹姆斯;S·杰夫 | 申请(专利权)人: | 隆萨有限公司 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071;C12N5/10 |
代理公司: | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人: | 陶家蓉 |
地址: | 瑞士*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 通过 降低 内源 蛋白质 水平 改善 生物 产物 生产 方法 | ||
本公开提供用于通过降低非必需内源性蛋白质的水平来增加由细胞或细胞系生产的产物,例如,蛋白质的量的方法、细胞或细胞系以及组合物。
本申请要求美国临时申请U.S.S.N.62/697,480(于2018年7月13日提交)的优先权并从中受益,其内容通过引用由此整体并入。
技术领域
本公开涉及用于修饰宿主细胞表达以增加在培养细胞中表达的产物(例如,多肽)的产量的方法和组合物。
背景技术
细胞产物(例如,重组治疗性蛋白质)通常在细胞表达系统(例如,哺乳动物细胞表达系统)中表达。在哺乳动物细胞系中表达了数百种市场认可的生物药物。然而,与其生产相关联的高成本导致全球健康成本的增加。
因此,需要开发和生产用于产生在培养细胞中表达的产物(例如,多肽)的方法。
发明内容
本公开部分地基于以下发现:在能够生产产物(例如,重组多肽)的细胞(例如,生产细胞)中降低一种或多种内源性蛋白质(例如,非必需、冗余和/或分泌性内源性蛋白质)的水平将增加产物的产量。
一方面,本发明涉及一种在细胞(例如,生产细胞)中制造产物(例如,重组多肽)的方法,所述方法包括:
降低所述细胞(例如,生产细胞)中的内源性蛋白质的水平,
从而制造所述产物。
另一方面,本发明涉及一种在细胞(例如,生产细胞)中制造产物(例如,重组多肽)的方法,所述方法包括:
提供细胞(例如,生产细胞),
降低所述细胞(例如,生产细胞)中的内源性蛋白质的水平,和
在适合于生产所述产物(例如,重组多肽)的条件下培养所述细胞,
从而制造所述产物。
另一个方面,本发明涉及一种能够生产产物(例如,重组多肽)的细胞(例如,生产细胞),其中所述细胞(例如,生产细胞)包括编码内源性蛋白质的所述基因或可操作地偶联到编码所述内源性蛋白质的所述基因的调控核酸序列(例如,启动子或增强子)的拷贝的缺失、取代或插入突变,例如其中所述突变降低所述内源性蛋白质的表达水平。
另一方面,本发明涉及一种能够生产产物(例如,重组多肽)的细胞(例如,生产细胞),其中所述细胞包括siRNA,所述siRNA例如能够结合到核酸(例如,编码内源性蛋白质或与其可操作地连接的调控元件(例如,启动子或增强子)的mRNA)。
另一方面,本发明涉及一种通过本文所述的方法或细胞生产的产物(例如,重组多肽)。
另一方面,本发明涉及一种药物组合物,其包括本文所述的产物(例如,重组多肽)。
另一方面,本发明涉及一种siRNA,所述siRNA能够结合到核酸(例如,编码选自表E5的内源性蛋白质的mRNA)。
在实施例中,产物(例如,多肽)是表1和2中提供的多肽中的一种或其变体。
在实施例中,所述产物是多肽。在实施例中,所述多肽是抗体(例如,单克隆抗体,例如IgG1抗体)或编码所述抗体的多核苷酸。在实施例中,所述抗体编码的多核苷酸中的一个或多个半胱氨酸被另一种氨基酸置换。在一些实施例中,一个或多个半胱氨酸被一个或多个丝氨酸残基置换。
一方面,本公开的特征在于一种用于在细胞(例如,重组宿主细胞,例如生产细胞)中生产本文所述的产物的方法。在一个实施例中,所述产物是多肽,例如重组多肽。
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