[发明专利]抑制微小RNA的非规范性靶标的诱导RNA干扰的核酸及其用途

说明书

本发明涉及诱导RNA干扰的核酸，其抑制微小RNA的非规范靶基因，其中特异性微小RNA的部分序列已被修改。通过使用本发明的诱导RNA干扰的核酸，有效提高了微小RNA通过抑制非规范靶基因而表现出的生物学功能，或者具有选择性表现常规微小RNA的仅一种生物学功能(即抑制非规范靶基因的功能)的益处。本发明的诱导干扰的核酸能够调节细胞周期、分化、去分化、形成、运动、分裂、增殖或死亡，并且本发明有望可用于各种领域，例如药物和化妆品领域。

技术领域

本发明涉及抑制基因表达的诱导RNA干扰的核酸及其用途，特别是涉及通过选择性抑制微小RNA的非规范(noncanonical)靶标而显示出有用的效果的诱导干扰的核酸及其用途。

本申请要求于2018年5月31日提交的韩国专利申请KR10-2018-0063054，于2018年5月31日提交的韩国专利申请KR10-2018-0063055，于2019年5月31日提交的韩国专利申请KR10-2019-0064333，于2019年5月31日提交的韩国专利申请10-2019-0064334，于2019年5月31日提交的韩国专利申请KR10-2019-0064335和于2019年5月31日提交的韩国专利申请KR10-2019-0064386的优先权和权益，其全部公开内容通过引用合并于此。

背景技术

RNA干扰是在转录后水平抑制基因表达的现象。自然发生的RNA干扰现象是由microRNA(miRNA)引起的。MiRNA由18至25个核苷酸组成，大多数miRNA是由约21个核苷酸组成的小RNA，具有通过Argonaute蛋白与靶基因的信使RNA(mRNA)互补的碱基序列。动物miRNA与Argonaute蛋白缔合(associated)，以具有与靶mRNA配对的部分碱基。在这种情况下，当在基于miRNA 5’末端的位置1至8的核苷酸所定义的种子区域中至少6个连续碱基被配对时，该序列被识别为靶标，最重要的是，当至少5’末端的2至7位的6个碱基连续与靶mRNA配对时，通过充分降解相应的靶mRNA或抑制翻译来抑制mRNA的表达(Lewis BP等人，2003，Cell，115(7)，787-98)。由于miRNA通过配对碱基配对识别靶基因的mRNA，因此一个miRNA通常可能影响数百至数千个基因的表达。

miRNA对靶基因表达的抑制作用是基因表达的主要机制之一，在正常情况下会参与细胞的分化和生长，并且在功能异常时会导致癌症，退行性疾病或糖尿病，因此，miRNA作为生命的关键吸引了人们的注意。因此，为了人为地诱导miRNA的基因表达抑制作用，具有miRNA的种子区域的RNA干扰物质(siRNA或shRNA)被设计成被转染到细胞中，从而人为地分化细胞或改变其功能，并且在某些情况下，被用作疾病的治疗剂。因此，通过Argonaute识别靶mRNA的miRNA种子区域中的互补碱基配对对于展现RNA干扰物质(例如miRNA)的适当功能是重要的。特别地，为了施加这种RNA干扰物质，需要鉴定miRNA的每种功能。在此，根据抑制了哪个靶基因来确定miRNA的功能，因此需要对miRNA的所有靶基因(靶标)进行分析。

在转录组水平上，发明人首次通过Ago HITS-CLIP(或称为CLIP-Seq)对miRNA靶复合物进行了研究。Ago HITS CLIP测定法是一种方法，其通过对细胞或组织样品进行紫外线照射，通过细胞中RNA与Argonaute蛋白(Ago)之间的共价键形成复合物，然后使用Ago特异性识别抗体通过免疫沉淀分离RNA-Ago复合物，并通过下一代测序分析分离的RNA。因此，可以准确地分析与Ago结合的miRNA，与其互补配对的靶mRNA基团及其位置(Chi S等人，Nature，2009，460(7254)：479-86)。