[发明专利]体液样本的品质评价方法

说明书

本发明提供鉴定依赖于体液样本的品质变化而存在量变化的基准miRNA，以该基准miRNA在样本中存在量作为指标评价体液样本的品质的方法。

技术领域

本发明涉及对于体液样本的品质，根据该体液样本中所含的特定miRNA的存在量进行评价的方法。

背景技术

miRNA(微RNA)从基因组DNA作为发夹样结构的RNA(前体)而被转录出来。该前体被具有特定的酶RNase III切割活性的dsRNA切割酶(Drosha、Dicer)切割后，变成双链形态，然后变成单链。并且，一般认为一条反义链被叫做RISC的蛋白质复合体摄入，参与mRNA的翻译抑制。这样，因为miRNA在转录后各阶段其形态不同，所以通常在以miRNA为检测对象的情况下，需要考虑发夹结构体、双链结构体、单链结构体等各种形态。miRNA由15～25个碱基的RNA组成，在各种生物中确认了其存在。

近年来发现，miRNA不仅在细胞内存在，在不含细胞的样本血清、血浆、尿、脊髓液等体液中也较多存在，提示其存在量可能成为以癌为代表的各种疾病的生物标志物。miRNA在2018年6月的现在，在人中存在2600种以上，在利用高灵敏度的DNA微阵列等测定体系的情况下，其中超过1000种的miRNA能够在血清/血浆中同时检测到表达。于是，进行了使用DNA微阵列法以血清/血浆、尿、脊髓液等体液为对象的生物标志物探索研究，并期待向能够早期发现疾病的生物标志物检查展开。

另一方面，已知RNA是容易由于热、分解酶、冻融等各种物理和化学因素而分解的物质，在使用DNA微阵列进行基因表达分析的情况下，RNA的分解影响存在量的测定。在作为疾病的生物标志物测定体液所含的miRNA的存在量的检查中，如果基于具有不确实性的存在量的测定值进行检查、诊断，则有时会由于丧失适当的治疗机会、应用了错误的医疗而带给患者不必要的经济、体力负担。因此，为了正确测定存在量，将作为检查目标的miRNA不分解的样本用于检查是极为重要的。

一直以来，作为测定RNA的分解度的方法，一般使用电泳，例如，可以根据来源于28S核糖体RNA的带与来源于18S核糖体RNA的带的浓度比(28S/18S)来测定。另外，作为别的方法，专利文献1中提出了根据RNA片段的长度不同来定量评价RNA的分解度的方法，其中，利用了如果核苷酸分解则片段长度变短这样的长链RNA的特征。

然而，在测定miRNA的存在量时，多利用短链级分的RNA，此时不含长链RNA，因此如上所述的现有方法不是用于测定RNA的分解度的有效方法。也可以根据基因表达分析结果的全基因的相关系数测定所使用的RNA的分解度，但需要全基因的数据，花费时间和工夫。因此，着眼于来源于长链RNA的分解片段，开发了以混入短链级分的分解片段作为指标评价短链级分中的miRNA的分解度的方法(专利文献2)。另外，专利文献3中公开了测定体液样本中所含的miRNA的分解度来评价品质的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2015-519045号公报

专利文献2：日本特开2008-35779号公报

专利文献3：国际公开第2017/146033号

发明内容

发明所要解决的课题

如上所述，为了正确测定目标RNA的存在量，测定样本中的RNA的分解度并评价样本品质是重要的。但是，前述的专利文献1、专利文献2的方法是利用核糖体RNA、长链RNA的方法。核糖体RNA、长链RNA是存在于核内、细胞质内的RNA，在例如血清、血浆、尿、脊髓液等体液样本中几乎不存在。因此，通过这些方法，不能正确测定体液样本所含的miRNA的分解度并评价品质。