[发明专利]通过因子VIII的表达改善临床参数

说明书

本文描述了用于肝特异性表达转基因的构建体。

相关专利申请的交叉引用

本申请要求于2018年8月3日提交的美国临时专利申请第62/714,553号的优先权；2019年3月29日提交的美国临时专利申请第62/826,887号；申请日为2019年7月1日的美国临时专利申请第62/869,445号，通过引用将其全部内容合并入本文。

序列表

本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2019年8月1日，名称为1147465_SL.txt，大小为28207字节。

发明背景

基因疗法可以用于遗传改造细胞以具有一个或多个失活的基因和/或使该细胞表达该细胞先前未产生的产物(例如，通过转基因插入和/或通过内源序列校正)。转基因插入的用途的实例包括插入编码一种或多种新型治疗性蛋白质的一种或多种基因，插入编码细胞或个体中缺乏的蛋白质的编码序列，将野生型基因插入含有突变的基因序列的细胞中，和/或插入编码结构核酸(例如microRNA或siRNA)的序列。内源基因序列的“校正”的有用应用的实例包括疾病相关基因突变的改变，编码剪接位点的序列的改变，调控序列的改变和/或编码蛋白质的结构特征的序列的定向改变。

肝基因转移提供了将转基因递送至受试者以治疗和/或预防各种病症(包括血友病(hemophilias)和溶酶体贮积病症(lysosomal storage disorders))的有效手段。参见，例如，美国专利号9,150,847和美国公开号20130177983和20140017212。还已经描述了针对肝定向基因治疗的特异性载体。参见，例如，WO 2014064277；WO 2009130208；EP2451474B1，Chuah et al.,(2014)Molecular Therapy,22,1605-1613；和’Nair et al.(2014)Blood 123:3195-3199。这些载体可以包括野生型小鼠微小病毒(MVM)内含子序列。参见，例如Haut and Pintel(1998)J.Virol.72:1834-1843；Haut and Pintel(1998)Virol.258:84-94。

诸如A型血友病和B型血友病的血友病是血液凝固系统的遗传性病症，其特征在于出血到关节和软组织，以及过度出血到遭受创伤或经受手术的任何部位。A型血友病在临床上与B型血友病没有区别，但A型血友病中缺乏或不存在VIII因子(FVIII或F8)，而B型血友病患者中缺乏或不存在IX因子(FIX或F.IX)。F8基因编码血浆糖蛋白，其以非活性形式与冯·威利布兰德(von Wilebrand)因子缔合而循环。表面损伤后，固有的凝血级联反应启动，并且FVIII从复合物中释放出来并被激活。激活的形式与因子IX一起激活因子X成为激活的Xa，最终导致纤维蛋白原(fibrinogen)转变为纤维蛋白(fibrin)并诱发血凝块。参见，Levinson et al.(1990)Genomics 7(1):1-11。40-50％的A型血友病患者具有涉及F8内含子22(也称为IVS22)的染色体倒置。该倒置是由F8基因的内含子22内的9.6kb序列与位于F8基因远端约300kb的两个紧密相关的反向定向序列之一之间的染色体内重组事件引起的，从而导致外显子1至22关于外显子23至26倒置，参见Textbook of Hemophilia.Lee et al.(eds)2005,Blackwell Publishing。其他A型血友病患者具有F8缺陷，包括活性位点突变，以及无义和错义突变。