[发明专利]用于进行定量实时PCR的反应混合物、方法和试剂盒

说明书

在提供用于进行定量实时PCR的反应批次的反应混合物的情况下，在该反应混合物中包含至少一种至少部分与待定量的DNA片段对应的靶DNA（11），和至少一种具有特定序列和特定量的参比DNA（12），和至少两种具有不同序列的不同荧光探针，它们在不同波长下生成信号，和引物和脱氧核苷酸和DNA聚合酶。靶DNA（11）和参比DNA（12）具有相同的引物结合位点（13、14）和不同的探针结合位点（17，18）。所述荧光探针的至少一种被设置用于在扩增子中与引物结合位点（13、14）之外的靶DNA（11）片段结合，并且所述荧光探针的至少一种被设置用于在扩增子中与引物结合位点（13、14）之外的参比DNA（12）片段结合。

本发明涉及反应混合物，其提供用于进行定量实时PCR的反应批次，以及涉及用于进行定量实时PCR的方法和涉及试剂盒。

现有技术

聚合酶链反应（PCR）是一种非常灵敏的生物分析方法。借助于酶，即DNA聚合酶，基于作为模板的DNA序列扩增DNA。在此，在各个循环中形成的产物用作各自下一个循环的模板。待复制的DNA在此被称为模板（模板DNA）。此外，需要所谓的引物，其在DNA的单链上分别规定DNA合成的起点。DNA合成在使用脱氧核苷酸的情况下通过温度稳定的DNA聚合酶被催化。对于各个PCR循环，首先进行双链DNA变性（解链），然后再进行引物杂交，即引物可结合到单链DNA的互补序列片段上（引物退火）。接着，DNA聚合酶附着，并且在所谓的延伸步骤（延伸）中发生引物的互补延伸。这些各个步骤由温度循环来控制。

PCR的一个实施方案是实时PCR（qPCR），在其中可以借助于荧光探针来追踪反应进程。在此，实时PCR允许定量模板DNA的起始量。通常，为此需要在并行反应批次中随同进行的参比测量。除定量参比测量外，在标准方式中也随同进行定性对照，以便能够排除假阳性或假阴性结果。

发明公开内容

发明优点

本发明提供了反应混合物，其被设置用于提供用于进行定量实时PCR的反应批次。利用该反应混合物，可以定量DNA序列，例如基因片段的DNA序列，其中，并行标准反应已经被集成到各自的反应批次或反应混合物中，因此不需要随同进行并行标准反应和对照反应。在此，特别的优点在于，可以在同一个反应批次（PCR批次）中测量所述定量和质量控制。就此而言，反应批次应理解为是指反应在一个反应容器中进行。因此，没有必要随同进行参比测量，从而可以大大节省PCR批次的费用。这可以提供相当大的优势，例如特别是在即时检测（PoC）应用中，因为在这种应用中通常直接为患者进行检查。在传统方法中，通常为此需要为各个患者准备相应的参比测量并且并行地随同进行。当使用本发明的反应混合物时，不需要这样。因此，可以有利地特别是在医学诊断中使用本发明的反应混合物和可借其进行的方法。