[发明专利]使用LC-MS/MS对蛋白质生物标志物进行定量

权利要求书

1.一种测定，其包括：

(1)使生物样品与至少一种蛋白水解酶接触以产生所述生物样品中存在的蛋白C1q的至少一个肽片段；以及

(2)执行所选反应监测质谱(SRM-MS)以测量所述至少一个C1q肽片段的丰度，其中所述至少C1q肽片段的所述丰度决定所述生物样品中的C1q的浓度。

2.根据权利要求1所述的测定，其进一步包括在步骤(1)与步骤(2)之间，向所述生物样品添加包括与所述至少一个C1q肽片段的氨基酸序列相同的氨基酸序列的至少一个标记的合成C1q肽片段。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的测定，其中测量所述至少一个C1q肽片段的所述丰度包括将与通过SRM-MS产生的至少一种C1q肽相对应的信号与标准曲线进行比较。

4.根据权利要求3所述的测定，其中所述标准曲线使用包括以下的方法产生：

(a)通过混合已知数量的经过纯化的C1q蛋白和C1q消耗的血清制备至少两种C1q浓度标准品；

(b)向所述至少两种C1q浓度标准品添加至少一个标记的合成肽片段，其氨基酸序列与预期在使所述C1q浓度标准品与蛋白水解酶接触后产生的至少一个C1q肽片段相同；

(c)使所述至少两种标记的C1q浓度标准品与蛋白水解酶接触以产生至少一个C1q肽片段；

(d)执行所选反应监测质谱，以确定与所述至少一个C1q肽片段相对应的信号的强度和与所述至少两种标记的C1q浓度标准品中的每一者中的所述至少一个标记的合成肽片段相对应的信号的强度；以及

(e)使用所述信号和所述已知数量的C1q蛋白确定标准曲线。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的测定，其中所述生物样品是：

i)血液样品；和/或

ii)人样品或非人灵长类动物样品。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的测定，其中所述至少一个肽片段包括：

i)至少5个氨基酸；和/或

ii)选自表2的肽；和/或

iii)SLGFCDTTNK(SEQ ID NO:26)、IAFSATR(SEQ ID NO:29)或QTHQPPAPNSLIR(SEQ IDNO:36)；和/或

iv)SLGFCDTTNK(SEQ ID NO:26)、IAFSATR(SEQ ID NO:29)或QTHQPPAPNSLIR(SEQ IDNO:36)中的至少两个；和/或

v)SLGFCDTTNK(SEQ ID NO:26)、IAFSATR(SEQ ID NO:29)和QTHQPPAPNSLIR(SEQ IDNO:36)中的每一个。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的测定，其中所述所选反应监测质谱为LC-SRM-MS/MS。

8.一种组合物，其包括至少一种分离的合成肽，所述组合物包括具有选自蛋白C1q的氨基酸序列的至少一种分离的合成肽，其中选自所述蛋白C1q的所述氨基酸序列是通过使C1q与至少一种蛋白水解酶接触而产生的C1q肽片段的序列。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述C1q来自人或来自非人灵长类动物。

10.根据权利要求8至9中任一项所述的组合物，其中所述至少一种分离的合成肽包括至少5个氨基酸。

11.根据权利要求1至7中任一项所述的测定或根据权利要求8至10中任一项所述的组合物，其中所述至少一种蛋白水解酶是胰蛋白酶。

12.根据权利要求8至11中任一项所述的组合物，其中所述至少一种分离的合成肽被标记。

13.根据权利要求8至12中任一项所述的组合物，其中所述至少一种分离的合成肽包括选自表2的肽。