[发明专利]使用LC-MS/MS对蛋白质生物标志物进行定量

说明书

本公开提供了用于确定生物样品中的蛋白质生物标志物的丰度和/或浓度的方法和组合物。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年8月8日提交的美国临时申请第62/715,973号的优先权和权益，所述美国临时申请的内容以全文引用的方式并入本文中。

序列表

本申请含有已经以ASCII格式经由EFS-Web提交并且特此以全文引用的方式并入本文中的序列表。创建于2019年7月29日的所述ASCII副本命名为“REGE-015-001WO_SeqList_ST25.txt”，并且大小为50,295字节。

背景技术

C1q是涉及先天免疫系统的补体系统的重要的成药蛋白。当前存在用于确定源自人的生物样品中的C1q的浓度的基于免疫的方法。然而，用于测定源自非人灵长类动物(临床前研究和试验中的重要模型生物体)的样品中的C1q的丰度的免疫试剂有限。因此，本领域中需要涉及确定源自人、非人灵长类动物和其它模型生物体的样品中的C1q浓度的方法和组合物，所述方法和组合物是快速、特异性且准确的，并且不需要昂贵且费时的免疫试剂开发。本公开解决了这些需求。

发明内容

本公开提供一种测定，其包括：(1)使生物样品与至少一种蛋白水解酶接触以产生所述生物样品中存在的蛋白C1q的至少一个肽片段；以及(2)执行所选反应监测质谱(SRM-MS)以测量所述至少一个C1q肽片段的丰度，其中所述至少C1q肽片段的所述丰度决定所述生物样品中的C1q的浓度。

前述测定可以进一步包括：在步骤(1)与步骤(2)之间，向所述生物样品添加包括与所述至少一个C1q肽片段的氨基酸序列相同的氨基酸序列的至少一个标记的合成C1q肽片段。

前述测定中的测量所述至少一个C1q肽片段的所述丰度可以包括将与通过SRM-MS产生的至少一种C1q肽相对应的信号与标准曲线进行比较。

本公开提供一种测定，其包括：(1)使生物样品与至少一种蛋白水解酶接触以产生所述生物样品中存在的蛋白C1q的至少一个肽片段；(2)执行所选反应监测质谱(SRM-MS)以产生与所述至少一个C1q肽片段相对应的信号；以及(3)通过将所述信号与标准曲线进行比较来确定所述至少一个C1q肽片段的丰度，其中所述至少一个C1q肽片段的所述丰度决定所述生物样品中的C1q浓度。

前述测定可以进一步包括：在步骤(1)与步骤(2)之间，向所述生物样品添加包括与所述至少一个C1q肽片段的氨基酸序列相同的氨基酸序列的至少一个标记的合成肽片段；以及在步骤(2)与步骤(3)之间，执行SRM-MS以产生与所述至少一种标记的合成肽相对应的信号。

所述生物样品可以是血液样品。所述生物样品可以是人样品。所述生物样品可以是非人灵长类动物样品。

所述至少一个肽片段可以包括至少5个氨基酸。所述至少一个肽片段可以包括选自表2的肽。

所述至少一个肽片段可以包括SLGFCDTTNK(SEQ ID NO:26)、IAFSATR(SEQ ID NO:29)或QTHQPPAPNSLIR(SEQ ID NO:36)。所述至少一个肽片段可以包括SLGFCDTTNK(SEQ IDNO:26)、IAFSATR(SEQ ID NO:29)或QTHQPPAPNSLIR(SEQ ID NO:36)中的至少两个。所述至少一个肽片段可以包括SLGFCDTTNK(SEQ ID NO:26)、IAFSATR(SEQ ID NO:29)和QTHQPPAPNSLIR(SEQ ID NO:36)中的每一个。

所述所选反应监测质谱可以为LC-SRM-MS/MS。

所述至少一种蛋白水解酶可以是胰蛋白酶。