[发明专利]使CAR T细胞恢复活力

说明书

本文中提供了与靶向配体缀合的药物载荷，其被专门设计成递送至耗竭的CAR T细胞以使这些CAR T细胞恢复活力。被靶向的CAR T细胞以融合受体进行修饰，所述融合受体可与所述靶向配体结合并且使所缀合的药物载荷内化，以执行其对耗竭的CAR T细胞的调节功能。

技术领域

本公开内容提供了使癌抗原耗竭的嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptorT，CAR T)细胞恢复活力(rejuvenate)的系统。具体地，所述系统在经典CAR构建体(construct)中包含融合受体，其中所述融合受体提供了配体结合模块(ligand bindingmodule)，其识别高亲和力配体-载荷药物缀合物(ligand-payload drug conjugate)以递送药物载荷，所述药物载荷被设计成阻断耗竭的CAR T中的抑制性信号传导或通过抗原非依赖性途径重新激活CAR T。

背景技术

在过去的二十年中，嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗领域取得了巨大进步。CAR构建体由四个部分组成：(1)针对肿瘤特异性抗原的胞外结合部分，(2)铰链结构域，(3)跨膜结构域，以及(4)多种激活结构域(例如，CD28、4-1BB和CD3ζ链)的组合。在针对CD19阳性B细胞白血病的CAR T治疗中取得了最令人印象深刻的成功，其中在多项临床试验中已达到超过80％的完全缓解率。

相比之下，迄今为止已证明通过CAR T治疗实体瘤更具挑战性。在临床前研究中，在免疫缺陷小鼠中使用同基因小鼠模型或异种移植肿瘤模型已经取得了巨大的成功。然而，涉及实体瘤(例如，乳腺癌、卵巢癌或肺癌)的临床试验均没有显示出与对照相比的改善。通常来说，其具有与其他过继细胞治疗所面临的相同局限性，包括(1)肿瘤穿透性差；(2)低氧压；(3)免疫抑制性肿瘤微环境，其包括肿瘤相关的巨噬细胞、成纤维细胞和抑制性细胞因子¹。CAR T细胞与肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)一样，可以通过这种抑制性微环境再培养(re-educated)并转变为“功能低下”状态，其特征在于共抑制分子(即，PD-1、Tim-3、LAG-3等)的过表达、降低的INFγ分泌和杀伤能力。来自卵巢癌患者样品的数据显示，大多数PD-1⁺CD8⁺T细胞缺乏CD 127的表达，已知CD 127对于T细胞中的效应子-记忆的转变是重要的。LAG-3的过表达也与TCR特异性CD8⁺TIL的效应子功能负相关。此外，PD-1⁺LAG-3⁺双阳性T细胞表现出较低的INFγ产生²。类似地，NY-ESO-1 TCR特异人T细胞在小鼠实体瘤模型中功能低下，表明由于微环境和通过持续暴露于抗原对T细胞的持续激活二者造成的共抑制分子的高表达和低效的抗肿瘤效果³。因此，为了更好的实体瘤治疗，非常期望逆转抑制性微环境，更重要的是，使耗竭的CAR T细胞恢复活力。

发明概述

本公开内容提供了使耗竭的经典CAR T细胞恢复活力的系统。所述系统包含至少两种组分：第一组分是包含与药物载荷共价连接的靶向配体的缀合物；并且第二组分是与膜锚定模块(membrane-anchoring module)连接的靶向配体结合模块。第二组分的靶向配体结合模块以高亲和力识别第一组分中的靶向配体以形成复合物，并且载荷药物阻断耗竭的CAR T的抑制性信号传导，或者通过抗原非依赖性途径重新激活所述CAR T。膜锚定模块介导该双组分复合物内化到耗竭的CAR T细胞中。

在一些优选的实施方案中，前述第一组分的靶向配体是叶酸(folate)、FITC或FK506。

在一些优选的实施方案中，前述第二组分的靶向配体结合模块包含叶酸受体、抗FITC抗体片段或FKBP。

在一些优选的实施方案中，前述膜锚定模块是叶酸受体。

在一些优选的实施方案中，前述第一组分包含在靶向配体与载荷药物之间的可释放的接头(linker)。