[发明专利]在模拟体内条件下的治疗性蛋白质选择

说明书

当前公开了一种在模拟体内条件下确定非特异性相互作用的影响的方法。所述方法包括：(a)使包含生物学相关分子拥挤剂和靶分子的溶液与生物传感器接触，其中所述生物传感器的表面包含特异性地结合所述靶分子的捕获分子；(b)使所述靶分子结合至所述捕获分子；以及(c)使用生物层干涉法测定结合至捕获分子的所述靶分子的量。

对序列表的引用

本申请以引用的方式并入以计算机可读形式提交为文件 10470WO01-Sequence.txt的序列表，所述序列表于2019年8月12日 创建且含有1466字节。

技术领域

本发明涉及生物药物，并且涉及在接近生理条件下测定治疗性生 物分子，如抗体的行为。

背景技术

体外结合平衡的正确分析必须限制在接近解离常数的浓度，通常 在微摩尔量级及以下。在这些条件下，蛋白质本质上充当理想分子， 并且任何非特异性相互作用都可容易地忽略。将蛋白质浓度增加到任 意高的值会导致大分子拥挤，其中复合物形成不再相对于蛋白质浓度 呈线性，并且从质量作用定律导出的结合方程更好地用热力学活性而 不是浓度表示(Neal,B.L.,D.Asthagiri和A.M.Lenhoff(1998). Molecular origins ofosmotic second virial coefficients of proteins. Biophys J 75(5):2469-2477)。活度系数的大小取决于整个溶液的组成； 非理想性不仅是由于蛋白质本身的水平升高，而且由于非相互作用大 分子和共溶质的存在。

对在非理想条件(与通常用于体外表征的那些显著偏离)下蛋白质 之间的非特异性相互作用的理解对于在生物学背景下获得更完整的 蛋白质功能图至关重要。因此，当前需要用于在模拟体内条件下确定 生物分子的非特异性相互作用的影响的方法。

发明内容

在一个方面，本发明提供了一种在模拟体内条件下确定非特异性 相互作用的影响的方法，其中所述方法包括：(a)使包含生物学相关分 子拥挤剂和靶分子的溶液与生物传感器接触，其中所述生物传感器的 表面包含特异性地结合所述靶分子的捕获分子；(b)使所述靶分子结合 至所述捕获分子；以及(c)使用生物层干涉法测定结合至捕获分子的所述靶分子的量。

在一些实施方案中，所述方法还包括将结合至所述捕获分子的靶 生物分子的量与对照阈值进行比较，所述对照阈值区分与所述溶液中 的其他分子具有吸引性非特异性相互作用和与所述溶液中的其他分 子具有排斥性非特异性相互作用的靶生物分子。

在所述方法的各种实施方案中，所述对照阈值是针对理想溶液、 稀溶液或半稀溶液中结合的量归一化的结合的量。

在所述方法的各种实施方案中，所述生物学相关分子拥挤剂包括 人血清白蛋白(HSA)。

在一些实施方案中，所述人血清白蛋白以生理相关浓度存在。

在一些实施方案中，所述人血清白蛋白以介于约1g/L与约100 g/L之间的浓度存在。

在一些实施方案中，所述方法还包括测定在所述生物学相关分子 拥挤剂的两种或更多种浓度下结合的量。

在所述方法的各种实施方案中，所述生物学相关分子拥挤剂包括 血清和/或血浆。

在一些实施方案中，所述方法还包括测定在两种或更多种pH值 下结合的量，例如以确定结合的pH依赖性。

在一些实施方案中，所述方法还包括测定在两种或更多种盐浓度 下结合的量，例如以确定结合的盐依赖性。

在所述方法的各种实施方案中，所述靶分子包含单克隆抗体，并 且所述捕获分子包含特异性地结合至所述单克隆抗体的抗原。

在所述方法的各种实施方案中，所述靶分子包含抗原，并且所述 捕获分子包含特异性地结合至所述抗原的单克隆抗体。