[发明专利]军团菌无炭培养基

说明书

本发明提供培养军团菌的体外方法，该方法包括在无炭固体琼脂培养基上培养军团菌，该培养基包括：血清，其中血清的浓度为1％‑35％(v/v)；氮源；和铁源。还提供了用于本发明方法的无炭固体琼脂培养基。

技术领域

本发明涉及一种用于在例如适于筛选抗生素的固体培养基上培养细菌的方法，以及碱土金属和/或碱金属在抑制细菌中的用途。

军团菌属是革兰氏阴性细菌的致病菌群，包括嗜肺军团菌(嗜肺军团菌)菌属，其引起“军团菌病”(一个总称，包括军团菌引起的所有疾病)的感染。这些疾病包括称为军团病的肺炎型疾病和称为庞蒂亚克热的轻度流感样疾病。军团菌通常是水生细菌，在诸如冷却塔、游泳池、家庭供水系统和淋浴器、制冰机、冷藏柜、漩涡水疗中心、温泉和喷泉等区域生长旺盛。

由于缺乏合适的培养方法和手段，培养军团菌(例如用于检测军团菌和/或诊断患有军团菌的受试者)受到干扰。一个相关的问题包括难以筛选新的军团菌抗生素和杀生物剂。这尤其成问题，因为军团菌对抗生素产生耐药性的风险是一个重大的公共卫生问题，因此有必要鉴定新的抗生素。目前，在平板上(例如在固体培养基上)培养军团菌依赖于缓冲木炭酵母提取物(BCYE)琼脂培养基的使用。尽管BCYE培养基已成为分离和培养军团菌的金标准，但其缺点是其中所用的木炭(被认为是吸收抑制军团菌生长的不明毒素所必需的)不利地非特异性地吸收抗生素。通过吸收培养基中的抗生素，木炭可防止抗生素与产生毒性的细菌接触，从而无法阐明抗生素(例如待筛选的候选抗生素)对军团菌生长的影响。

然而，以前在没有木炭的情况下培养军团菌的尝试依赖于使用液体培养物，例如在缓冲酵母提取物肉汤培养基中。这种培养不允许使用固体培养基(例如琼脂平板)进行自动化的高通量筛选方法，并且需要在与肉汤接触后对筛选设备进行灭菌。但是，由于缺乏对高度敏感的军团菌细菌无毒的培养基成分(例如添加剂和成分)的了解，进一步固体培养方法和手段的发展受到影响。

本发明解决了一个或多个上述问题。

本发明提供一种无炭固体琼脂培养基，其允许在琼脂衍生毒素存在下在固体培养基上培养军团菌，而不需要木炭。这种毒素被认为是自由脂肪酸和/或自由基。不需要对培养基中使用的琼脂进行特殊处理。例如，不需要用水清洗琼脂。这是非常有利的，并且避免了可能因洗涤而导致的琼脂(例如高压灭菌的琼脂)的无菌性受损。

本发明基于以下令人惊讶的发现，即可以从包含血清的琼脂基固体培养基中省略木炭，其中血清允许军团菌在琼脂上生长(例如在琼脂源性毒素存在下)。这是非常出乎意料的，因为以前认为木炭是用于固体培养的琼脂基培养基的必要组分(吸收未定义的毒素，否则毒素会抑制军团菌的生长)。出于这个原因，在现有技术中通常使用木炭(例如，要求使用)，尽管木炭也吸收抗生素的事实。本发明的无碳固体琼脂培养基有利地不(例如显著地)干扰其中抗生素的活性。因此，无碳固体琼脂培养基特别适合在确定细菌对抗生素的敏感性时(例如在抗生素筛选期间)培养军团菌。

一方面，本发明提供用于培养军团菌的体外方法，包括在无碳固体琼脂培养基上培养军团菌，所述无碳固体琼脂培养基包含：

a)血清，其中血清的浓度为1％-35％(v/v)；

b)氮源；和

c)铁源。

术语“体外”包括军团菌的离体培养。

本发明的另一方面提供无炭固体琼脂培养基在培养军团菌中的用途，其中无炭固体琼脂培养基包含：

a)血清，其中血清的浓度为1％-35％(v/v)；

b)氮源；和

c)铁源。

本发明的另一方面提供用于培养军团菌的无炭固体琼脂培养基，包含：

a)血清，其中血清的浓度为1％-35％(v/v)；

b)氮源；和