[发明专利]从免疫工程化多能干细胞衍生的嵌合抗原受体T细胞

权利要求书

1.分离的低免疫原性诱导多能干细胞(HIP)，其包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，

其中已消除内源性β-2微球蛋白(B2M)基因活性和内源性II类反式激活因子(CIITA)基因活性，并且已增加CD47表达。

2.权利要求1的分离的HIP细胞，其中所述CAR包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。

3.权利要求2的分离的HIP细胞，其中所述细胞外结构域与选自CD19、CD20、CD22、CD38、CD123、CD171、CS1、BCMA、MUC16、ROR1和WT1的抗原结合。

4.权利要求2或3的分离的HIP细胞，其中所述细胞外结构域包含单链可变片段(scFv)。

5.权利要求2至4中任一项的分离的HIP细胞，其中所述跨膜结构域包含CD3ζ、CD4、CD8α、CD28、4-1BB、OX40、ICOS、CTLA-4、PD-1、LAG-3和BTLA。

6.权利要求2至5中任一项的分离的HIP细胞，其中所述细胞内信号传导结构域包含CD3ζ、CD28、4-1BB、OX40、ICOS、CTLA-4、PD-1、LAG-3和BTLA。

7.权利要求2至6中任一项的分离的HIP细胞，其中在已消除B2M基因活性和CIITA基因并且已增加CD47表达之后，将编码CAR的核酸引入iPSC。

8.权利要求1至7中任一项的分离的HIP细胞，其中所述HIP细胞是人诱导多能干细胞，所述B2M基因是人B2M基因，所述CIITA基因是人B2M基因，并且增加的CD47表达是由将至少一个拷贝的人CD47基因导入所述iPSC中处于启动子的控制下引起的。

9.权利要求1至7中任一项的分离的HIP细胞，其中所述HIP细胞是小鼠诱导多能干细胞，所述B2M基因是小鼠B2M基因，所述CIITA基因是小鼠B2M基因，并且增加的CD47表达是由于将至少一个拷贝的小鼠CD47基因导入所述iPSC中处于启动子的控制下而产生的。

10.权利要求8或9的分离的HIP细胞，其中所述启动子是组成型启动子。

11.权利要求1至10中任一项的分离的HIP细胞，其中B2M基因活性的消除是由破坏所述B2M基因的两个等位基因的成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/Cas9反应引起的。

12.权利要求1至11中任一项的分离的HIP细胞，其中CIITA基因活性的消除是由破坏所述CIITA基因的两个等位基因的CRISPR/Cas9反应引起的。

13.权利要求1至12中任一项的分离的HIP细胞，其还包含诱导所述低免疫原性多能细胞死亡的被触发剂激活的自杀基因。

14.权利要求13的分离的HIP细胞，其中所述自杀基因是单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因，并且所述触发剂是更昔洛韦。

15.权利要求14的分离的HIP细胞，其中所述HSV-tk基因编码与SEQ ID NO：4具有至少90％序列同一性的蛋白质。

16.权利要求14的分离的HIP细胞，其中所述HSV-tk基因编码包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的蛋白质。

17.权利要求13的分离的HIP细胞，其中所述自杀基因是大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因，并且所述触发剂是5-氟胞嘧啶(5-FC)。