[发明专利]从免疫工程化多能干细胞衍生的嵌合抗原受体T细胞

说明书

本发明提供了普遍可接受的“现成的”低免疫性多能(HIP)细胞和来源于HIP细胞的低免疫性嵌合抗原受体T(CAR‑T)细胞。可将工程化的治疗细胞作为基于细胞的过继免疫疗法施用至受试者以治疗癌症。

I.相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年7月17日提交的62/698,941的优先权，其全部内容通过引用并入本文。

II.发明领域

本发明涉及过继免疫疗法领域。本发明提供了从包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸的低免疫原性多能(HIP)干细胞分化的表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞，例如T细胞。对工程化的HIP细胞进行基因修饰以使其纯和地不含β-2微球蛋白(B2M)基因，纯和地不含II类反式激活因子(CIITA)基因，并过表达CD47。

III.发明背景

过继细胞免疫疗法利用抗原特异性免疫细胞，例如T细胞或自然杀伤(NK)细胞来治疗许多疾病，包括癌症和抗体介导的移植物排斥。不幸的是，由于缺乏通用的肿瘤特异性T细胞，目前的过继性T细胞疗法受到限制。例如，Kymriah^TM(tisagenlecleucel,Novartis)和Yescarta^TM(axicabtagene ciloleucel,Kite)使用患者自身的T细胞来进行CAR-T治疗。

这样的过继性T细胞疗法基于自体细胞转移。T淋巴细胞从患者中回收，进行基因修饰或离体选择，在体外培养以扩增细胞数量，最后注入患者体内。除了淋巴细胞输注外，还可以对患者使用放射或化学疗法进行预处理，并施用淋巴细胞生长因子(例如IL-2)以促进和支持T细胞的植入和/或治疗反应。

每个患者接受使用患者自身的淋巴细胞的个别制造的治疗。这种自体疗法面临大量的技术和后勤问题。例如，治疗细胞必须在配备有专业人员的昂贵的专用设施中产生，并且它们必须在患者诊断后的短时间内产生。在某些情况下，由于对患者的预处理，分离的淋巴细胞可能很差地发挥功能并且以非常低的数量存在，因此使得其难以产生有效量的治疗细胞用于治疗患者。

因此，需要用于过继免疫疗法的“现成的(off-the-shelf)”治疗性抗原特异性T细胞。

IV.发明概述

一方面，本发明提供了分离的低免疫原性或低免疫性多能干细胞(HIP细胞)，其包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，其中已消除内源性β-2微球蛋白(B2M)基因活性和内源性II类反式激活因子(CIITA)基因活性，并且已增加CD47表达。CAR可包含细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。

在一些实施方案中，细胞外结构域与选自CD19、CD20、CD22、CD38、CD123、CD171、CS1、BCMA、MUC16、ROR1和WT1的抗原结合。在某些实施方案中，细胞外结构域包含单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，跨膜结构域包含CD3ζ、CD4、CD8α、CD28、4-1BB、OX40、ICOS、CTLA-4、PD-1、LAG-3和BTLA。在某些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含CD3ζ、CD28、4-1BB、OX40、ICOS、CTLA-4、PD-1、LAG-3和BTLA。

在某些实施方案中，CAR包含抗CD19 scFv结构域、CD28跨膜结构域和CD3ζ信号传导细胞内结构域。在一些实施方案中，CAR包含抗CD19 scFv结构域、CD28跨膜结构域、4-1BB信号传导细胞内结构域和CD3ζ信号传导细胞内结构域。

在各种实施方案中，在已消除B2M基因活性和CIITA基因并且已增加CD47表达之后，将编码CAR的核酸引入HIP细胞。