[发明专利]接种有细胞的基质的冷冻保存及相关方法

说明书

本文公开了用于鉴定活力增强细胞特征和基质特征的方法和组合物，因为所述活力增强细胞特征和基质特征与基质接种的细胞的冷冻保存后存活有关。本发明的实施方式进一步涉及鉴定细胞特征以制备可用于细胞培养和治疗各种疾病的上清液。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年9月7日提交的美国临时申请号62/728,646的权益，其全部内容通过援引并入本文用于所有目的。

关于联邦政府资助的研发的发明权声明

不适用

背景技术

1.发明领域

本申请总体上涉及用于将超薄基质植入目标组织的仪器和方法，所述超薄基质适于与干细胞一起接种以用于干细胞疗法、微泡和用于药物递送的注入凝胶，以及其他治疗性处理。超薄基质可进一步用于细胞的可复制培养和一旦接种细胞后冷冻保存。

2.相关技术的描述

涉及细胞损失或受损的人类疾病的范围是巨大的，包括但不限于眼病、神经变性疾病、内分泌疾病、心血管疾病和癌症。细胞疗法涉及使用细胞来治疗患病或受损的组织。它正迅速成为准备好治疗许多疾病的技术的最前沿，尤其是会影响对传统药物疗法无应答的个体的那些。这些疾病中的许多会受益于长期集中的目标区域治疗，这会减少全身性副作用。然而，某些药物，例如蛋白质治疗剂，价格昂贵，每小瓶要花费数千美元，并且需要无休止的重复治疗。

实际上，许多可以应用细胞疗法的疾病并不是致命的，而是涉及正常生理功能的丧失。例如，眼病通常涉及影响视觉的各种眼组织的功能变性，并因此影响许多个体的生活质量。

哺乳动物的眼是一种特化的感觉器官，能够将前视光学系统(角膜和晶状体)聚焦的入射光子转换为神经化学信号。这种光转导过程允许通过视神经将动作电位发送到更高的皮层中心，从而实现视觉。眼的视网膜包括对各种水平的光敏感的光感受器和将信号从光感受器传递到视网膜神经节细胞的中间神经元。这些光感受器是眼(如果不是身体)中代谢最活跃的细胞，并由视网膜色素上皮(RPE)细胞在代谢和功能上支持。这些RPE细胞位于眼的单层中，并且对视觉至关重要。

许多病理可能会损害或完全消除个体感知视觉图像的能力，包括眼外伤、感染、变性、血管不规则和炎症问题。视网膜的中央部分被称为黄斑，其负责中央视觉、精细的可视化和颜色区分。除其他病理外，黄斑功能可能受到老化相关的黄斑变性(湿性或干性)、糖尿病性黄斑水肿、特发性脉络膜新生血管形成、高度近视黄斑变性或晚期色素性视网膜炎的不利影响。

老化相关的黄斑变性通常会由于视网膜受损而导致视野中央(黄斑)视力丧失。这是老年人(50岁)视力障碍的主要原因。黄斑变性以“湿性”和“干性”形式出现。

在干性形式下，细胞碎片(玻璃膜疣)会积聚在RPE细胞层和脉络膜之间，这会对RPE细胞产生不利影响，从而导致其功能障碍、变性以及最终死亡。依靠有活力的(viable)RPE细胞执行重要的支持功能的视网膜光感受器细胞功能失调，并且继发于RPE细胞病理而死亡。

在更严重的湿性形式中，脉络膜中新形成的血管浸润黄斑后的空间；新形成的血管很脆弱，并且经常漏血，从而导致光感受器及其支持细胞的死亡。

尽管引起对特定细胞或组织破坏的疾病是细胞疗法的明确候选者，但是本领域仍然需要改进的细胞疗法方法，其包括改善细胞疗法功效的方法、基质和工具，以及允许长期储存要用于此类疗法中的有功能的且有活力的细胞的方法和组合物。

发明内容

在各种实施方式中，本发明总体上涉及用于在基质上生长的细胞的冷冻保存的方法和组合物。特别是，用于在聚合物基质上接种的和/或生长的细胞的冷冻保存的方法和组合物。在某些应用中，细胞是视网膜色素上皮(RPE)细胞、光感受器细胞、干细胞、分化前细胞、此类细胞的分化、或其组合，而与细胞的分化、起源或培养历史无关。