[发明专利]具有改良链置换能力的突变型DNA聚合酶

权利要求书

1.一种DNA聚合酶，其与对照DNA聚合酶相比具有增加的5′-3′链置换活性和显著降低的5′-3′核酸外切酶和核酸内切酶活性，其中所述DNA聚合酶的氨基酸序列在与SEQ ID NO：1的以下位置相对应的位置包含一个或多个突变、或突变的组合：

686、693、516、633、415、420、636、752、768、525、694、491、516、515、666、402、555、582、737、759、521、546、668、456、507、571、652、832、498、524、598、616、444、498、660、673、493、511、648、749和635，并且其中，所述对照DNA聚合酶包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：40或SEQID NO：42的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其中在SEQ ID NO：1的对应位置的所述一个或多个突变、或突变的组合选自：

I686V、A693V、T516I、V633I、Q415H、E420D、E636G、N752S、V768M、R525G、F694S、Q491H、T516S、S515F、T666M、E402V、V555A、N582D A737T、A759T、L521Q、T546A、N668S、A456T、K507M、T571A、S652F、S515F、A832V、D498E、L524V、R598G、M616I、A444T、D498E、M660K、Y673N、E493D、T511S、M648I、M749L和/或Q635K。

3.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其中：

i.与SEQ ID NO：1的位置686相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除I以外的任何氨基酸；

ii.与SEQ ID NO：1的位置693相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除A以外的任何氨基酸；

iii.与SEQ ID NO：1的位置516相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除T以外的任何氨基酸；

iv.与SEQ ID NO：1的位置633相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除V以外的任何氨基酸；

v.与SEQ ID NO：1的位置415相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除Q以外的任何氨基酸；

vi.与SEQ ID NO：1的位置420相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除E以外的任何氨基酸；

vii.与SEQ ID NO：1的位置636相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除E以外的任何氨基酸；

viii.与SEQ ID NO：1的位置752相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除N以外的任何氨基酸；

ix.与SEQ ID NO：1的位置768相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除V以外的任何氨基酸；

x.与SEQ ID NO：1的位置525相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除R以外的任何氨基酸；

xi.与SEQ ID NO：1的位置694相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除F以外的任何氨基酸；

xii.与SEQ ID NO：1的位置491相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除Q以外的任何氨基酸；

xiii.与SEQ ID NO：1的位置515相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除S以外的任何氨基酸；

xiv.与SEQ ID NO：1的位置666相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除T以外的任何氨基酸；

xv.与SEQ ID NO：1的位置402相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除E以外的任何氨基酸；

xvi.与SEQ ID NO：1的位置555相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除V以外的任何氨基酸；

xvii.与SEQ ID NO：1的位置582相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除N以外的任何氨基酸；

xviii.与SEQ ID NO：1的位置737相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除A以外的任何氨基酸；

xix.与SEQ ID NO：1的位置759相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除A以外的任何氨基酸；

xx.与SEQ ID NO：1的位置521相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除L以外的任何氨基酸；

xxi.与SEQ ID NO：1的位置546相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除T以外的任何氨基酸；

xxii.与SEQ ID NO：1的位置668相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除N以外的任何氨基酸；

xxiii.与SEQ ID NO：1的位置456相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除A以外的任何氨基酸；

xxiv.与SEQ ID NO：1的位置507相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除K以外的任何氨基酸；

xxv.与SEQ ID NO：1的位置571相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除T以外的任何氨基酸；

xxvi.与SEQ ID NO：1的位置652相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除S以外的任何氨基酸；

xxvii.与SEQ ID NO：1的位置832相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除A以外的任何氨基酸；

xxviii.与SEQ ID NO：1的位置498相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除D以外的任何氨基酸；

xxix.与SEQ ID NO：1的位置524相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除L以外的任何氨基酸；

xxx.与SEQ ID NO：1的位置598相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除R以外的任何氨基酸；

xxxi.与SEQ ID NO：1的位置616相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除M以外的任何氨基酸；

xxxii.与SEQ ID NO：1的位置444相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除A以外的任何氨基酸；

xxxiii.与SEQ ID NO：1的位置660相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除M以外的任何氨基酸；

xxxiv.与SEQ ID NO：1的位置673相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除Y以外的任何氨基酸；

xxxv.与SEQ ID NO：1的位置493相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除E以外的任何氨基酸；

xxxvi.与SEQ ID NO：1的位置511相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除T以外的任何氨基酸；

xxxvii.与SEQ ID NO：1的位置648相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除M以外的任何氨基酸；

xxxviii.与SEQ ID NO：1的位置749相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除M以外的任何氨基酸；和/或

xxxix.与SEQ ID NO：1的位置635相对应的所述DNA聚合酶的氨基酸是除Q以外的任何氨基酸。