[发明专利]用于预测肝功能障碍的微小RNA特征

说明书

本发明涉及一种确定受试者肝功能障碍风险的体外方法，特别是确定在肝部分切除术后受试者肝功能障碍的风险，所述方法包括以下步骤：提供所述受试者的样本，测定所述样本中至少一种miRNA的表达水平，所述miRNA选自由miR‑151a、miR‑192和miR‑122组成的组，并将这些表达水平与至少一个参考表达水平进行比较，或者鉴定miR‑151a与miR‑192和/或miR‑122与miR‑151a的表达水平比值，将所述表达水平比值与参考表达水平比值进行比较，以及根据比较结果，将样本划分为至少两个类别中的一个，其中每个类别是至少两个分类为“高风险”和“低风险”中的一个。

技术领域

本发明提供了一种方法，具体地是一种体外方法，用于确定受试者肝功能障碍的风险，尤其是在肝脏切除后受试者肝功能障碍的风险，其中对来自所述受试者的样本中的一种或多种选定的miRNA的水平进行定量。

背景技术

在许多肝脏恶性肿瘤中，肝脏切除是唯一的根治疗法。切除术后肝脏再生是确定肝切除术患者临床结果的主要决定因素(1)，因为肝切除术后肝再生不足会导致术后肝功能障碍(liver dysfunction，LD)，肝脏大部分切除后多达30％的患者会出现这种情况(2)。重要的是，目前可用于术后LD患者的治疗方案非常有限，并且这些治疗方案主要是根据症状和以目标为导向(2，3)。因此，在肝脏手术前进行风险分级以优化患者选择是减少术后LD和伴随并发症发生率的关键。此外，既在肝切除术后识别有肝功能障碍风险的患者，并且监测患者对旨在刺激肝脏再生的治疗的反应，对于提供最佳的患者护理而言都是至关重要的。然而，目前可用的标记物大多昂贵、耗时，并且有时还具有侵入性，因此迫切需要一种易于评估的测试，以确定肝功能障碍和预测术后肝功能恢复情况。

新的证据表明微小RNA(microRNA)(miRNA)特征是多种疾病的有效诊断、预后和治疗反应的生物标记物(4)。miRNA作为多种基因在不同组织中表达的主要调控因子，可以在转录水平上控制几乎每个细胞过程，包括细胞发育、增殖、迁移、存活、代谢、稳态和再生(5)。基于计算分析的估计表明，超过50％的人类转录组受至少一种miRNA的调控(6)。因此，这就不奇怪miRNA的异常表达会对信号通路产生有害影响，并且确实与许多各种不同的疾病有关，(7-9)。迄今为止，已鉴定出近2000种miRNA，其中一些已被证实可用于各种恶性疾病的体外诊断和/或预后，证明了它们作为临床生物标记物的潜力(10-12)。

例如，WO2011/076141A1和EP2196543A1提供了用于肝细胞癌诊断的微小RNA生物标记物。WO2012/151736A1公开了可用于诊断肝细胞癌，或者区分肝细胞癌与慢性乙型肝炎或肝硬化的微小RNA生物标记物。例如，WO2016/036994A1利用微小RNA分析与致癌基因等其他生物标记物相结合，用于诊断肝癌。

US20170166975A1公开了一种用于检测肝癌的试剂盒或装置，其包含能够与患者样本中的微小RNA特异性结合的核酸。

CN101418343A公开了一种用于预测早期原发性肝癌患者术后肝癌复发的试剂盒。

还发现微小RNA可作为恶性肿瘤以外疾病的生物标记物。例如，WO2018/231851A1公开了一种诊断非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)或肝纤维化的方法，其中对患者样本中的一种或多种微小RNA的水平进行检测。

除了一些miRNA的高度组织特异性表达谱外，它们还提供了生物标记物中所追求的其他有益特征，例如，通过非侵入性方法，miRNA能够容易地从诸如血液、尿液和唾液等生物流体中获得。此外，它们表现出高稳定性和相对较低的复杂性(例如，无后处理修饰)，并且可以通过具有高特异性的各种方法容易地进行评估，这些方法允许信号扩增，使它们优于包括DNA、RNA和蛋白质的其他类型的生物标记物。

微小RNA还被用来调节靶mRNA的翻译。例如，US2016089453A1公开了使用miR-122作导向以修饰肝脏细胞中mRNA的RNA调节剂。