[发明专利]糖化血红蛋白(％)测定方法

说明书

本发明要解决的问题是提供一种在含有血红蛋白的血液样品中含有异常血红蛋白如HbS或HbC的情况下也能够准确地测定血液中的糖化血红蛋白(％)的测定方法和测定试剂。本发明提供了通过组合两种类型的单克隆抗体，即抗糖化血红蛋白单克隆抗体和针对抗糖化血红蛋白单克隆抗体的单克隆抗体，即使在含有异常血红蛋白的样品中也能够准确测量血液中糖化血红蛋白(％)的方法，以及用于实施该方法的测定试剂。

技术领域

本发明涉及使用免疫反应的糖化血红蛋白(％)测定方法和测定试剂。更具体地，本发明涉及使用多种单克隆抗体的糖化血红蛋白(％)测定方法和测定试剂。

背景技术

血红蛋白A1c(以下也简称为HbA1c)是葡萄糖非酶促地结合在血红蛋白的β链N末端的氨基酸残基的α-氨基上的糖化血红蛋白。血红蛋白由两个α链和两个β链构成，并具有异四聚体结构。已知血液中HbA1c的比率反映了糖尿病的相对长期的血糖控制状态，并且测量HbA1c对于了解血糖控制状态在临床上非常有意义。以下技术已知为HbA1c的免疫学测定方法。

专利文献1公开了一种HbA1c(％)测定方法，其中使未敏化的乳胶与含有HbA1c的样品反应，然后与抗HbA1c抗体反应，以测量吸附HbA1c的乳胶通过抗HbA1c抗体的凝集。在该测定方法中，仅使用一种针对HbA1c的单克隆抗体。

专利文献2公开了一种凝集免疫测定法，其中将样品中的HbA1c吸附到不溶性载体颗粒例如乳胶上，与抗HbA1c单克隆抗体(第一抗体)反应，然后进一步与选择性地结合于单克隆抗体的第二抗体反应，选择性地凝集不溶性载体颗粒。尽管在此测定法中使用了两种类型的抗体，但是单克隆抗体只是用作抗HbA1c单克隆抗体的第一抗体，与抗HbA1c单克隆抗体结合的第二抗体是多克隆抗体，而不是单克隆抗体。

已知包含第一试剂和第二试剂的HbA1c(％)测定试剂是常规产品，所述第一试剂含有乳胶，所述第二试剂含有抗人HbA1c单克隆抗体与抗小鼠IgG抗体的结合物质(非专利文献1、2)。根据该测定试剂，血液中的HbA1c被吸附在乳胶上，抗体的结合物质与吸附在乳胶上的HbA1c发生免疫反应，由此产生的乳胶凝集为浊度。

如上所述，正常的血红蛋白是由两条α链和两条β链构成的异四聚体，但是已知在某些非洲人和美国黑人的血液中存在异常血红蛋白，其β链的一部分发生了突变。具体实例包括HbS，其中来自血红蛋白(Hb)的β链N末端的第六个Glu突变为Val，和HbC，其中同样第六个Glu突变为Lys。尽管具有携带有这种突变序列的异常血红蛋白的HbS症状或HbC症状的日本人的数量非常少，但是这些人仍然以一定比例存在。当通过常规的HbA1c测定方法测量具有这种异常血红蛋白症状的患者的血液时，发现HbA1c的测量值(％)(严格地说，糖化血红蛋白例如糖化HbS和糖化HbC的测量值(％))变得高于HPLC方法，无法进行的准确测量值(参见稍后描述的实施例中的比较例2)。

专利文献3描述了一种检测样品中存在的糖化血红蛋白的方法，该方法通过脯氨酸特异性内肽酶消化内肽酶处理的含人血红蛋白的样品，并定量获得的糖化五肽的水平，以检测样品中所有糖化血红蛋白，而不考虑糖化血红蛋白的形式，即检测糖化人血红蛋白A、糖化人血红蛋白S和糖化人血红蛋白C。该方法利用了以下事实：脯氨酸特异性内肽酶消化含有血红蛋白A、血红蛋白S和血红蛋白C的样品，在每种情况下都会产生相同的糖化五肽，即血红蛋白A、血红蛋白S和血红蛋白C。

通过使用小鼠单克隆抗HbA1c抗体的凝集抑制测量方法进行上述糖化五肽的定量。然而，该方法需要两种类型的肽酶处理步骤，并且操作复杂。

引文文献列表

专利文献

专利文献1：日本专利公开号特开平6-66795

专利文献2：日本专利公开号特开平6-167495

专利文献3：日本未审查专利申请公开号特表2011-503632

非专利文献