[发明专利]利用多重荧光染料对未缔合的病毒尺寸颗粒进行流式细胞术评估的方法、试剂盒和染色剂组合物

权利要求书

1.用于流式细胞术评估流体样品中利用在水性液体中易发生π堆积相互作用的多重荧光染料染色的未缔合的病毒尺寸颗粒的方法，所述方法包括：

利用多种不同荧光染料制备浓缩的染料配制剂的第一制备工序(preparatoryprocessing)，所述多种不同荧光染料各具有不同荧光发射签名，并且各含有至少一个在水性液体中易发生π堆积相互作用的芳香基团，所述第一制备工序包括将来自干粉染料组合物的荧光染料溶解于第一液体介质，所述干粉染料组合物具有所述多种不同荧光染料的干粉混合物，其中所述第一液体介质包含二甲基亚砜(DMSO)，并且所述多种不同荧光染料包括至少具有第一荧光发射签名的第一荧光染料和具有不同于所述第一荧光发射签名的第二荧光发射签名的第二荧光染料；

所述第一制备工序之后，第二制备工序，同时使所述荧光染料保持在溶液中以制备水性稀释的染料配制剂，所述水性稀释的染料配制剂包含溶解于水性液体介质的所述多种不同荧光染料，所述第二制备工序包括用水性液体稀释剂稀释所述第一液体介质；

制备用于流式细胞术评估的经染色的流体样品，其包括将至少一部分所述水性稀释的染料配制剂与生物材料样品混合，所述生物材料样品待通过流式细胞术评估所述未缔合的病毒尺寸颗粒的存在；

所述制备之后，使所述经染色的流体样品在流式细胞仪中进行流式细胞术，以检测和计数用所述第一荧光染料和所述第二荧光染料二者染色的所述未缔合的病毒尺寸颗粒的出现。

2.权利要求1的方法，其中:

所述第二制备工序包括用所述水性液体稀释剂稀释所述第一液体介质，所述水性液体稀释剂与所述第一液体介质的体积比为至少10:1；并且

所述第二制备工序期间，用所述水性液体稀释剂稀释所述第一液体介质，以制备具有水与DMSO的重量比为至少10:1的水性液体介质。

3.权利要求1的方法，其中所述第二制备工序期间，用所述水性液体稀释剂稀释所述第一液体介质，以制备具有水与DMSO的重量比为至少10:7，至少10:6，至少10:5，至少10:4，至少10:3，至少10:2.5，至少10:2或至少10:1.5的水性液体介质。

4.权利要求1或权利要求3中任一项的方法，其中所述第二制备工序期间，用所述水性液体稀释剂稀释所述第一液体介质，以制备含有DMSO重量百分比范围为5重量％至35重量％的水性液体介质。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中所述浓缩的染料配制剂基本由所述多种不同荧光染料和所述第一液体介质组成。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述浓缩的染料配制剂基本由所述多种不同荧光染料和DMSO组成。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述第一制备工序包括将所述干粉染料组合物与所述第一液体介质混合，并且混合后在所述第二制备工序期间用所述水性液体稀释剂稀释所述第一液体介质之前，允许所得到的混合物静置至少7分钟的停留时间。

8.权利要求1至7中任一项的方法，其中所述制备期间制备的所述经染色的流体样品包含溶解的二糖。

9.权利要求8的方法，其中所述制备期间制备的所述经染色的流体样品包含所述溶解的二糖，其浓度范围为1重量％至15重量％。

10.权利要求8或权利要求9的方法，其中:

所述制备包括将至少一部分所述水性稀释的染料配制剂与含有所述生物材料的初步流体样品混合，并且其中所述初步流体样品包含二糖，以在所述经染色的流体样品中提供至少一部分所述溶解的二糖；并且

所述初步流体样品中所述二糖的浓度范围为1重量％至22.5重量％。