[发明专利]信使RNA的无泵包封

说明书

本发明特别提供了一种将信使RNA(mRNA)包封于脂质体中的方法，所述方法包括：a.以第一受控流速提供包含mRNA溶液的第一流，b.以第二受控流速提供包含脂质溶液的第二流，以及c.将所述第一流和所述第二流混合以形成包封mRNA的脂质体，其中在不使用泵的情况下实现所述第一受控流速和所述第二受控流速。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年10月19日提交的美国临时申请序列号62/747,838的优先权，该临时申请的公开内容据此以引用的方式并入。

背景技术

信使RNA疗法(MRT)正在成为治疗多种疾病的越来越重要的方法。MRT涉及信使RNA(mRNA)至有需要的患者的施用。所施用的mRNA在患者体内产生mRNA编码的蛋白质。脂质体和/或脂质纳米颗粒通常被用于包封mRNA以实现mRNA的有效体内递送。然而，目前用于产生负载mRNA的脂质纳米颗粒的方法由于低包封效率、低mRNA回收率和/或异质性粒度而受到影响。目前方法的另一个缺点是需要使用专用设备(诸如齿轮泵、蠕动泵等等)来进行包封方法。在某些位置，诸如患者护理环境，这种专用设备可能不容易获得。

发明内容

本发明特别提供了脂质纳米颗粒制剂和mRNA包封的改进方法。具体而言，本发明基于以下令人惊讶的发现：即用于核酸的脂质包封的基于重力的混合过程具有可重复的、高效的包封效率。

本发明提供了使用基于重力的混合过程的具有成本效益、稳健和对使用者友好的mRNA包封方法。用于包封核酸的基于重力的混合过程的一些有益效果包括例如可变性较小，液体的无脉冲流动在不需要机器驱动的执行器的情况下实现精确、可重现的混合流速。本文所述的重力混合过程的其他优点包括不需要校准或冗长的设置、具有成本效率、低维护和稳健的物理设计(例如，无移动部分和/或最少的附件)。本文所述的发明特别提供了一种可扩展的系统，所述系统允许在独立于容量的情况下以最小的材料损失同时制备多种制剂。此外，本文所述的发明提供了过程变量的灵活性，至少是因为重力作用下的流动可以根据流动路径的直径微调，这继而在流速方面允许更大的灵活性。

因此，在一个方面，本发明提供了一种将信使RNA(mRNA)包封于脂质体中的方法，所述方法包括：a.以第一受控流速提供包含mRNA溶液的第一流，b.以第二受控流速提供包含脂质溶液的第二流，以及c.将所述第一流和所述第二流混合以形成包封mRNA的脂质体，其中在不使用泵的情况下实现所述第一受控流速和所述第二受控流速。

在另一个方面，本发明提供了一种将信使RNA(mRNA)包封于脂质体中的方法，所述方法包括：a.以第一受控流速提供包含mRNA溶液的第一流，b.以第二受控流速提供包含脂质溶液的第二流，以及c.将所述第一流和所述第二流混合以形成包封mRNA的脂质体，d.其中步骤a-c中的每个在重力进料下和无外部压力的情况下进行。

在一些实施方案中，如权利要求1或2所述的方法，其中所述第一流由第一导管提供；并且所述第二流由第二导管提供，并且其中所述第一导管和所述第二导管通过接头来连接，从而将所述mRNA溶液和所述脂质溶液混合。

在一些实施方案中，所述接头包括T型连接器或Y型连接器。

在一些实施方案中，所述第一导管被连接至容纳所述mRNA溶液的第一储集器，并且所述第二导管被连接至容纳所述脂质溶液的第二储集器。

在一些实施方案中，第一限流控制所述第一受控流速，并且第二限流控制所述第二受控流速。

在一些实施方案中，所述第一限流和所述第二限流提供相同的受控流速。

在一些实施方案中，所述第一限流和所述第二限流提供不同的受控流速。