[发明专利]使用合成的mRNA将尿细胞直接重编程为神经干细胞的方法在审
申请号: | 201980071535.9 | 申请日: | 2019-08-28 |
公开(公告)号: | CN113015793A | 公开(公告)日: | 2021-06-22 |
发明(设计)人: | 刘承权;姜泌俊;孙多练;洪源晙;尹愿真;李章辅;朴圭万;金仁勇;朴正贤;郑杰;高威威;张志勳;全恩暻;尹炳善 | 申请(专利权)人: | 思特科技公司 |
主分类号: | C12N5/0797 | 分类号: | C12N5/0797;C12N5/10;A61K35/30;A61P25/28;A61P25/16;A61P25/14;A61P25/08;A61P25/00;A61P9/10 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 黄爱娇 |
地址: | 韩国*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 使用 合成 mrna 细胞 直接 编程 神经 干细胞 方法 | ||
1.用于将尿细胞直接重编程为神经干细胞的组合物,所述组合物包含:
(i)Oct4蛋白或编码所述Oct4蛋白的核酸;
(ii)Sox2蛋白或编码所述Sox2蛋白的核酸;
(iii)Klf4蛋白或编码所述Klf4蛋白的核酸;以及
(iv)Glis1蛋白或编码所述Glis1蛋白的核酸。
2.根据权利要求1所述的组合物,其中,所述尿细胞是源自尿的体细胞。
3.根据权利要求1所述的组合物,其中,编码所述Oct4、Sox2、Klf4和Glis1蛋白的所述核酸是合成的mRNA。
4.用于将尿细胞直接重编程为神经干细胞的方法,所述方法包括:
(a)从尿中分离尿细胞并培养所述尿细胞;
(b)将权利要求1或3所述的组合物引入培养的尿细胞中;
(c)通过在神经干细胞诱导培养基中培养已经引入所述组合物的尿细胞,诱导直接重编程为神经干细胞;以及
(d)从已被神经干细胞诱导培养基诱导直接重编程的细胞中选择具有与神经干细胞相似特征的神经干细胞系。
5.根据权利要求4所述的方法,其中,在步骤(b)中,编码所述Oct4、Sox2、Klf4和Glis1的合成的mRNA的引入使用电穿孔来引入所述合成的mRNA。
6.根据权利要求4所述的方法,其中,在步骤(c)中,所述培养基通过以1:1的体积比混合DMEM/F12培养基和神经基础培养基并添加1×N2、1×B27、人LIF、TGF-β抑制剂和GSK3-β抑制剂至培养基混合物来获得。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,所述培养基还包含以下中的一种或多种:Shh激动剂、腺苷酸环化酶激活剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂和抗坏血酸2-磷酸酯。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,在低氧(O2不足)条件下进行所述培养基中的培养。
9.用于预防或治疗神经损伤疾病的药物组合物,所述药物组合物包含作为活性成分的通过权利要求4至8中任一项所述的方法制备的直接重编程的神经干细胞。
10.根据权利要求9所述的药物组合物,其中,所述神经损伤疾病选自由以下组成的组:帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、匹克氏病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化症、缺血性脑病(中风)、脱髓鞘疾病、多发性硬化症、癫痫、退行性神经疾病和脊髓损伤。
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