[发明专利]使用合成的mRNA将尿细胞直接重编程为神经干细胞的方法

说明书

本发明涉及通过引入去分化因子Oct4、Sox2、Klf4和Glis1的mRNA从尿细胞诱导神经干细胞去分化的方法；以及用于预防或治疗神经损伤疾病的组合物，该组合物包含作为有效成分的通过该方法诱导的神经干细胞。

技术领域

本发明涉及用于将尿细胞直接重编程为神经干细胞的方法以及用于治疗神经损伤疾病的药物组合物，该药物组合物包括通过该方法制备的重编程的神经干细胞。

背景技术

干细胞是指对自我更新或分化具有无限潜力的细胞，这些自我更新或分化与体内所需的特定细胞和组织有关。干细胞分为三种类型：从早期胚胎分离的胚胎干细胞(ES细胞)、从胚胎原始生殖细胞分离的胚胎生殖细胞(EG细胞)和从成体组织分离的多能成体祖细胞(MAPC细胞)。

由于干细胞具有分化为带特定功能的细胞的潜力，因此干细胞已成为恢复各种器官的功能、作为细胞治疗剂的研究对象，近来，干细胞的应用已扩展到整形外科和美容领域。

可以以两种方式大致概括成体干细胞在体内的作用。第一，干细胞本身分化为我们体内的组织和细胞，并使受损的组织和细胞再生；以及第二，干细胞在其寿命期间不断分泌生长因子和蛋白质(例如细胞因子)，以帮助邻近细胞的生长和再生。

直接重编程(Direct reprogramming)是一种允许根据需要将体细胞转化为其他类型的细胞的技术。由于直接重编程不像日本山中(Yamanaka)教授的重编程那样经历多能干细胞状态，因此直接重编程可以节省时间并展示出高效率水平，同时解决了与肿瘤发生有关的风险以及由多能干细胞进一步分化导致的成本。然而，当前进行的直接重编程方法主要使用小鼠细胞作为细胞源，因此在人类体细胞中以相同方式再生的可能性不高。此外，在人类体细胞中经常使用皮肤细胞(成纤维细胞)，但是在这种情况下，需要一种收集细胞来源的侵入性方法，并且这给供体带来了疼痛和安全风险，并且便利性变差。另外，临床应用是困难的，因为通过在直接重编程过程中引入所需的重编程因子(基因)的方法主要使用病毒，并且使用病毒的基因整合系统不适用于治疗，因为该系统会因不加选择地插入基因组中而诱发突变。

因此，本发明人使用容易收集的源自人尿的细胞作为细胞来源并使用合成的mRNA的转染以将重编程因子引入细胞中来解决上述问题，并确认了从尿细胞高效直接重编程为神经干细胞所需的最佳培养条件，从而完成了本发明。

相关技术文献

韩国专利申请特许号10-2013-0087020

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供用于将尿细胞直接重编程为神经干细胞的组合物。

本发明的另一个目的是提供用于将尿细胞直接重编程为神经干细胞的方法。

本发明的又一个目的是提供用于预防或治疗神经损伤疾病的方法，该方法包括施用作为活性成分的从尿细胞重编程的神经干细胞。

本发明的又一个目的是提供用于预防或治疗神经损伤疾病的药物组合物，该药物组合物包含作为活性成分的从尿细胞重编程的神经干细胞。

技术方案

本发明提供用于将尿细胞直接重编程为神经干细胞的组合物，该组合物包含：

(i)Oct4蛋白或编码该Oct4蛋白的核酸；

(ii)Sox2蛋白或编码该Sox2蛋白的核酸；

(iii)Klf4蛋白或编码该Klf4蛋白的核酸；以及

(iv)Glis1蛋白或编码该Glis1蛋白的核酸。