[发明专利]新纯化方法

权利要求书

1.一种从含有目的多肽和杂质的样品中纯化所述目的多肽的方法，所述方法包含以下步骤：

i)使含有所述目的多肽和杂质的所述样品与色谱树脂接触，而不将所述样品进行初始澄清步骤；

ii)将步骤i)的所述样品与所述色谱树脂一起孵育足够的时间，以使所述树脂结合所述目的多肽，优选在搅拌条件下进行；

iii)在中空纤维或任何切向过滤系统中再循环所述色谱树脂，从而在去除所述杂质的同时浓缩所述目的多肽；

iv)通过渗滤清洗含有所述目的多肽和所述杂质的样品，以去除杂质；

v)从所述色谱树脂洗脱所述目的多肽；

vi)通过渗滤从所述色谱树脂回收纯化的目的多肽。

2.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中所述色谱树脂选自由蛋白A、蛋白A相关、阳离子交换和阴离子交换树脂所组成的组。

3.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中所述色谱树脂是阳离子交换树脂。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述回收的纯化的多肽可选择地通过至少一个额外的纯化步骤进一步纯化。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述至少一个额外的纯化步骤选自由亲和色谱法、阳离子交换色谱法、阴离子交换色谱法和混合模式色谱法所组成的组。

6.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中所述回收的纯化的多肽可选择地使用超滤(UF)、渗滤(DF)或其组合(UF/DF)进一步浓缩。

7.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中含有所述目的蛋白的样品的pH比所述目的蛋白的pI高至少1单位。

8.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中含有待纯化的所述目的蛋白的样品的电导率在约0至约20mS/cm的范围内。

9.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中含有所述目的多肽和杂质的样品选自由收获液或后收获物(即，在进一步处理之前在低温下保持的收获物)所组成的组。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述收获液是粗收获物、粗后收获物或者对其进行溶解和重折叠的收获物或后收获物。

11.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中所述目的蛋白已在重组细胞中产生，并由所述重组细胞分泌或包含在由所述重组细胞产生的包涵体中。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述重组细胞是诸如细菌细胞的原核细胞或诸如酵母的低等真核细胞。

13.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中所述目的多肽选自由重组蛋白、融合蛋白、免疫球蛋白或抗体或其任何片段所组成的组。

14.根据前述权利要求的任意一项所述的方法，其中所述杂质选自由目的蛋白的聚集体或片段或其混合物、一种或多种的宿主细胞蛋白、内毒素、病毒、核酸分子、脂质、多糖及其任何组合所组成的组中的至少一种。