[发明专利]用于肌萎缩性侧索硬化疗法中的胆固醇24-水解酶的表达载体

说明书

本发明涉及用于治疗肌萎缩性侧索硬化的载体，所述肌萎缩性侧索硬化与额颞痴呆和相关运动神经元紊乱有关联或无关联，所述载体包含编码胆固醇24‑羟化酶的核酸。

技术领域

本发明涉及肌萎缩性侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis)的治疗。

背景技术

肌萎缩性侧索硬化(ALS)是属于运动神经元紊乱组的罕见神经疾病，所述运动神经元紊乱主要涉及负责控制自主肌肉运动(如咀嚼、行走和说话)的神经元(Zarei S等，2015)。ALS的特征在于运动神经元逐渐退化和死亡，从脑延伸至脊髓，并延伸至整个身体的肌肉。ALS涉及上运动神经元(来自脑中的运动神经元的信息传递至脊髓)和下运动神经元(脑中的运动核)二者，所述神经元退化并因此停止向肌肉发送信息，肌肉逐渐变弱、开始抽搐并变得萎缩(Rowland LP等，2001)。

患有ALS的大多数人在首次症状出现后3年至5年内死亡，通常是由于呼吸衰竭。症状发作后，仅10％的患有ALS的人生存超过10年。

在ALS中，数个潜在的风险因素已被关联：年龄，症状通常出现在55岁至75岁之间；性别，ALS在男性中稍微更普遍；以及种族和民族，高加索人和非西班牙裔最有可能发展为ALS。

但是，绝大多数ALS病例(90％)是散发性的。相对地，约10％的ALS病例是家族性的(FALS)。对于这些家族性病例，涉及了数个基因：C9ORF72、SOD1、FUS、TARDBP和更近期的SMCR8(Greenway等2006；Kabashi等，2008；Kaur等，2016；Turner MR等，2017；Ticozzi等，2011；Valdmanis PN等，2008)。

关于ALS的病理生理学，在考虑之中的有数个方面，主要理论中的一种与RNA加工有关，特别是基于以下的发现：在多数ALS病例中包含TDP-43以及诸如TARDBP和FUS的基因作为ALS的遗传原因。这两个基因均与前体mRNA(pre-mRNA)剪接、RNA转运和翻译有关。包含C9orf72重复序列的前体mRNA可隔绝核RNA结合蛋白，从而使其无法正确剪接其它mRNA。ALS的另一个公认的方面是蛋白质聚集，包括SOD1、TDP43和FUS，这可以在ALS患者和动物模型二者中观测到。已提出，聚集体干扰正常的蛋白质稳态并诱导细胞应激。此外，蛋白质聚集体可隔绝正常细胞功能必需的其它蛋白质或RNA。

到目前为止，尚无已知的ALS治愈方法。仅有两种药物经FDA批准用于ALS：利鲁唑和依达拉奉。据信利鲁唑通过降低谷氨酸水平起作用来减少对运动神经元的损害。利鲁唑将生存期延长了数个月，但并没有逆转神经元中已经存在的损害(Zoccolella等，2007)。关于依达拉奉，仅证实其使日常损害的临床评估下降(Brooks等，2018)。因此，存在开发用于ALS疗法的新策略的迫切需要。

发明内容

本发明人现在提出通过调节胆固醇代谢途径来对抗ALS，更具体而言，通过包含编码胆固醇24-羟化酶的核酸的载体的方式，所述载体在靶细胞中表达胆固醇24-羟化酶。

因此，本发明的目的是提供用于治疗肌萎缩性侧索硬化的载体，所述载体包含编码胆固醇24-羟化酶的核酸。

在实施方式中，所述载体包含编码氨基酸序列SEQ ID NO:2的核酸序列。或者，所述载体包含核酸序列SEQ ID NO:1。

在实施方式中，所述载体选自于由腺病毒载体、慢病毒载体、逆转录病毒载体、疱疹病毒载体和腺相关病毒(AAV)载体所组成的组，优选AAV载体，更优选AAV9、AAV10(AAVrh.10)或AAVPHP.eB载体，甚至更优选AAVPHP.eB。

在实施方式中，将所述载体直接给予至患者的脑和/或脊髓中，优选给予至脊髓和/或运动皮层。

本发明的另一目的是提供用于治疗肌萎缩性侧索硬化的药物组合物，所述药物组合物包含含有编码胆固醇24-羟化酶的核酸的载体。