[发明专利]在自动化模块和仪器中对经核酸酶经编辑的序列的改进的检测

权利要求书

1.一种用于执行经核酸引导的核酸酶编辑的细胞的富集的方法，所述方法包括：

-在生长培养基中提供转化的细胞，其中，所述细胞包含核酸引导的核酸酶的编码序列、供体DNA序列的编码序列和gRNA序列的编码序列，其中，至少所述gRNA的编码序列在诱导型启动子的控制下；

-允许所转化的细胞生长直至所述细胞生长至对数期的至少60％；

-诱导一种或更多种核酸引导的核酸酶编辑组分的转录；以及

-允许所述细胞进行编辑并且然后生长。

2.根据权利要求1所述的富集方法，其中，所述核酸引导的核酸酶编辑组分在单个载体上提供至所述细胞。

3.根据权利要求1所述的富集方法，其中，所述细胞为细菌细胞、酵母细胞或哺乳动物细胞。

4.根据权利要求1所述的富集方法，所述富集方法还包括在第二允许步骤之后，使所述细胞成为电感受态并且用在诱导型启动子的控制下的第二轮核酸引导的核酸酶编辑组分转化所述细胞的步骤。

5.根据权利要求1所述的富集方法，其中，使所述转化的细胞生长至对数期的至少75％。

6.根据权利要求5所述的富集方法，其中，使所述转化的细胞生长至少对数期的至少85％。

7.根据权利要求6所述的富集方法，其中，使所述转化的细胞生长至少对数期的至少95％。

8.根据权利要求7所述的富集方法，其中，使所述转化的细胞生长直至它们处于生长静止期。

9.根据权利要求1所述的富集方法，其中，所述诱导型启动子为在温度升高时活化的启动子。

10.根据权利要求9所述的富集方法，其中，所述诱导型启动子为pL启动子。

11.根据权利要求10所述的富集方法，其中，通过将所述细胞的温度升高至42℃来诱导转录。

12.根据权利要求1所述的富集方法，其中，所述诱导型启动子为在添加诱导部分时被活化的启动子。

13.一种自动化独立式多模块细胞处理仪器，所述自动化独立式多模块细胞处理仪器用于执行经核酸引导的核酸酶编辑所编辑的细胞的自动化富集，所述自动化独立式多模块细胞处理仪器包括：

-用于接受细胞的接受器；

-用于接受核酸的接受器，所述核酸包含核酸酶的编码序列、引导核酸的编码序列和DNA供体序列的编码序列，其中，至少所述引导核酸的转录在诱导型启动子的控制下；

-第一生长模块，所述第一生长模块用于使待被转化的细胞生长；

-过滤模块，所述过滤模块用于浓缩生长的细胞和使所述生长的细胞成为电感受态；

-转化模块，所述转化模块用于用所述核酸转化所述电感受态细胞；

-第二生长模块，所述第二生长模块用于使转化的细胞生长，其中，所述第二生长模块包括容器，所述容器用于使细胞生长；分光光度计，所述分光光度计被配置为监测所述转化的细胞的生长；和温度组件，所述温度组件用于提供诱导所述诱导型启动子的温度；

-处理器；以及

-自动化液体处理系统，所述自动化液体处理系统用于根据所述处理器运行的脚本将液体从所述用于接受细胞的接受器移动至所述第一生长模块，将液体从所述第一生长模块移动至所述过滤模块，将液体从所述过滤模块移动至所述转化模块，将液体从所述用于接受核酸的接受器移动至所述转化模块，并将液体从所述转化模块移动至所述第二生长模块，而无需用户干预。

14.根据权利要求13所述的自动化独立式多模块细胞处理仪器，其中，所述第二生长模块还包括警报器，以警告用户所述细胞已经达到对数期的60％或更多。