[发明专利]具有稳定的Fc受体表达的IL-2依赖性NK-92细胞

说明书

本文提供了表达高亲和力CD16但不表达IL‑2的IL2依赖性细胞群体。这些细胞在保留细胞毒性的同时保持Fc受体CD16的稳定表达。在一些实施方案中，与激活前细胞上的CD16表达水平相比，当细胞被激活时CD16的表达水平降低不超过20％。还提供了包含所述细胞的组合物和试剂盒，以及制造和使用IL2依赖性细胞的方法。

相关申请

本申请要求2018年11月26日提交的美国临时申请第62/771,479号的权益。出于所有目的，所述临时申请的内容通过引用整体并入本文。

背景技术

用单克隆抗体进行的抗癌治疗显著改善了癌症患者的临床结果。治疗性抗体的主要作用机制之一是通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。自然杀伤细胞可用作用于基于细胞的免疫疗法的细胞毒性效应细胞，因为它们是ADCC的主要效应细胞。

本文中称为的是在患有非霍奇金淋巴瘤的受试者的血液中发现的，且然后离体永生化的细胞溶解性癌细胞系。细胞来源于NK细胞，但缺乏正常NK细胞呈现的主要抑制性受体，而同时保留了大多数激活性受体。然而，细胞不攻击正常细胞，也不在人体内引发不可接受的免疫排斥反应。细胞系的表征在WO1998/49268和美国专利申请公开号2002-0068044中公开。细胞也被评估为治疗某些癌症的潜在治疗剂。

尽管细胞保留了与NK细胞相关的几乎所有激活性受体和细胞溶解途径，但其在细胞表面上不表达CD16。CD16是识别并结合抗体的Fc部分以激活NK细胞用于ADCC效应机制的Fc受体。由于其缺乏CD16受体，未修饰的细胞不能通过ADCC机制来裂解靶细胞。

天然的NK细胞表达CD16，但是当NK细胞被各种刺激激活时，CD16易于受到ADAM17介导的蛋白水解切割。例如，已知NK细胞与K562肿瘤细胞共培养刺激CD16切割蛋白酶，其导致NK细胞中CD16表面表达的脱落。激活后，NK细胞中CD16的这种快速下调严重损害了NK细胞的ADCC活性。

发明内容

本文提供了修饰的细胞群体、包含该细胞的组合物和试剂盒以及制备和使用该细胞群体的方法。修饰的细胞表达CD16(例如，Fc受体CD16的高亲和力变体)，而不表达IL-2。这些修饰的细胞表现出高水平的CD16表达，并且在通过刺激剂、靶细胞结合或ADCC激活期间和/或之后保持该表达水平。CD16的这种稳定表达使得修饰的细胞能够在和/或ADCC期间实现靶细胞的连续杀伤。从修饰的细胞排除IL-2转基因使IL-2转基因的负面影响最小化，并允许灵活引入可赋予修饰的所需性质的另外的转基因。例如，IL-2可能因细胞泄漏或细胞死亡而在体内释放。IL-2可促进Treg的募集和扩增，从而导致免疫抑制。高剂量的IL-2已被证明在患者中诱导强烈的副作用，例如增加的感染、瘀斑和出血、疲劳等的风险。参见https://www.cancerresearchuk.org/about-cancer/cancer-in-general/treatment/cancer-drugs/drugs/aldesleukin/side-effects。从细胞省略IL-2将避免这些不良作用。

上述修饰的细胞在本文中被称为“IL2依赖性CD16阳性细胞”或“IL2依赖性细胞”。

在一些实施方案中，本公开提供了表达CD16(SEQ ID NO:1)的修饰的细胞群体，其中修饰的细胞不表达IL-2，并且其中该群体包含一个或多个修饰的细胞。修饰的细胞可包含CD16的核酸(SEQ ID NO:2)。在一些实施方案中，修饰的细胞具有ADCC。

在一些实施方案中，与激活前细胞上的CD16表达水平相比，当细胞被激活时修饰的细胞的CD16表达水平降低不超过20％。在一些实施方案中，与接触前的细胞相比，在细胞与靶细胞接触后对CD16阳性的细胞的百分比降低不超过10％。

在一些实施方案中，修饰的细胞在激活后未表现出CD16表达减少或CD16表达减少不超过20％，并且其中修饰的细胞在激活开始后保持细胞毒性稳态至少5小时。