[发明专利]靶向EPN1的抗体

说明书

本文中描述了epsin‑1(EPN1)的特异性抗体，该EPN1是表达于各种癌细胞的表面上的一种抗原。还描述了用于治疗、改善和诊断以EPN1表达的肿瘤细胞为特征的各种类型的癌症的方法。

技术领域

本发明领域涉及用于治疗或检测癌症的基于抗体的疗法。

背景技术

人类适应性免疫系统通过细胞(T细胞)过程和体液(B细胞)过程来作出应答。体液应答使得B细胞选择和克隆扩增，这些B细胞表达能够结合到抗原的表面结合免疫球蛋白(Ig)分子。体细胞超变和类别转换过程与克隆扩增一致地发生。这些过程共同地导致已针对靶抗原亲和力成熟且含有属于4个一般种类(M、D、A、G或E)中的一类的恒定结构域的分泌抗体。各类的抗体(IgM、IgD、IgA、IgG和IgE)都以不同方式与细胞免疫系统相互作用。已针对靶抗原亲和力成熟的抗体的标志可包括：1)相对于种系基因的核苷酸和(后续)氨基酸变化；2)与靶抗原的高结合亲和力；3)与其它蛋白质相比与靶抗原的结合选择性。

众所周知，肿瘤患者可以针对肿瘤细胞抗原产生免疫应答。这些抗原可以源自在肿瘤内部导致突变蛋白的基因变化，或者原本正常的蛋白质向免疫系统的异常呈递。异常呈递可通过包括但不限于下列的过程而发生：新生儿蛋白的异位表达、细胞内蛋白在细胞表面的错误定位或细胞的裂解。酶的异常表达会导致蛋白质糖基化中的变化，也可以导致由体液免疫系统识别的非自身抗原的产生。

选择性地结合到疾病相关蛋白(包括那些与癌症相关的)的抗体已被证明可成功地以产生治疗效果的方式来调节其靶蛋白的功能。人类免疫系统针对突变或者异常蛋白质产生抗体应答的能力表明，患者的免疫应答可包括能够识别关键肿瘤驱动因子且调节其功能的抗体。

膜运输有助于对大范围细胞过程的调控。细胞表面受体的内化是适当调节生长因子受体介导的信号传导的关键机制。经由网格蛋白包被囊泡进行内化代表了肿瘤相关受体从表面内化的一种途径。将所述受体加载到网格蛋白包被小泡(CCPs)中用于随后内化于网格蛋白包被囊泡中是一种所述途径中的第一步骤。受体进入CCPs中的部分地取决于与衔接分子(如Epsin-1(EPN1)的相互作用。

EPN1是一种定位在细胞膜的大约60.3kDa的蛋白质。其含有与PI(4,5)P2-、泛素-、和网格蛋白/AP-2相互作用结构域。下调EPN1的内源性表达、过度表达突变形式的EPN1、或使用被设计用于阻断EPN1与其载荷分子的相互作用的试剂处理细胞，都可以抑制已知CCP依赖性载荷的内化。这种载荷的实例是VEGFR和ERBB3。

发明内容

本发明提供用于蛋白质的特异性抗体，Epsin 1(EPN1)，包括具有V_H和V_L骨架EPN1特异性抗体及分别与序列编号:4和8相关的互补区的EPN1特异性抗体、或其片段；以及具有一个或多个分别对应于序列编号:9-14的互补决定区(“CDRs”)H-CDR1、H CDR2、H-CDR3、L-CDR1、L CDR2和L-CDR3的EPN1特异性抗体。

本发明还提供用于治疗、改善或诊断以EPN1表达肿瘤细胞为特征的各种类型癌症的组合物和方法。前述组合物和方法的实施方案包括天然抗EPN1抗体、其片段、其变体。例如，本发明抗体的实施例包括但不限于：单域抗体、Fab片段、Fab'片段、F(ab)'₂片段、单链Fv蛋白(“scFv”)、和二硫键稳定的Fv蛋白(“dsFv”)。在各种实施方案中，本发明抗体可含有保留V_H区与V_L区之间的正确折叠和稳定化所需的残基以及保留分子的低pI和低毒性的氨基酸序列修饰。在某些实施方案中，根据本发明的在治疗或诊断方法中所使用的抗体可以偶联到效应分子，包括治疗剂、诊断剂、或者半衰期和生物利用度提高分子。